CpG-ODN對Hela細胞FasL-Fas凋亡途徑影響的實驗研究.pdf

1、目的: 觀察CpG-ODN對HeLa細胞和Jurkat細胞FasL、Fas mRNA表達水平的影響，篩選CpG-ODN與HeLa和Jurkat細胞的最適工作濃度和最適作用時間，在最適工作濃度和最適作用時間條件下觀察CpG-ODN對HeLa和Jurkat細胞凋亡的影響。
　　 方法: 不同濃度的CpG-ODN(M362)體外孵育HeLa和Jurkat細胞12小時后實時熒光RT-PCR檢測FasL、Fas mRNA的表達水平，由此決

2、定CpG-ODN的最適工作濃度；在最適工作濃度時，M362體外孵育HeLa和Jurkat細胞4、12、24、36、48小時后實時熒光RT-PCR檢測FasL、Fas mRNA的水平，由此決定CpG-ODN的最適作用時間；應(yīng)用HeLa細胞與Jurkat細胞共培養(yǎng)的方法體外研究CpG-ODN對HeLa細胞和Jurkat細胞相互作用中FasL-Fas途徑所致細胞凋亡的作用。
　　 結(jié)果:
　　 ① CpG-ODN的作用呈濃度依

3、賴性。與對照組相比，CpG-ODN的濃度為0.001μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L時，HeLa和Jurkat細胞與M362作用12h后處理組FasL mRNA的rER值的差異在CpG-ODN的濃度為0.001μmol/L、0.01μmol/L不具有統(tǒng)計學意義(p>0.05)，在CpG-ODN的濃度為0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L時，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.

4、05)，在處理組1μmol/L和10μmol/L之間的差別不具統(tǒng)計學意義。
　　 ② CpG-ODN的作用呈時間依賴性。與時間點0小時相比，CpG-ODN的濃度為最適濃度1μmol/L時，HeLa和Jurkat細胞與M362作用4、12、24、36、48小時后FasL mRNA的rER值在12、24、36、48小時處均有統(tǒng)計學差異(p<0.05)，在4小時處沒有統(tǒng)計學意義；與時間點24小時相比，36、48小時處均沒有統(tǒng)計學差異。

5、
　　 ③ CpG-ODN能不同程度的下調(diào)HeLa和Jurkat細胞FasLmRNA的表達。1μmol/L的M362與HeLa和Jurkat細胞作用24小時后FasL mRNA的rER值均有所下降，且HeLa細胞的下降幅度比Jurkat細胞大，與作用前相比，差別有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　 ④ CpG-ODN對HeLa和Jurkat細胞Fas mRNA的表達水平?jīng)]有影響。1μmol/L的M362與HeLa和Jur

6、kat細胞作用24小時后Fas mRNA的rER值變化不一，與作用前相比差別均不具有統(tǒng)計學意義(p>0.05)。
　　 ⑤ CpG-ODN能減少HeLa誘導的Jurkat細胞凋亡。CpG-ODN預處理的HeLa細胞與Jurkat細胞共培養(yǎng)后Jurkat細胞凋亡率為(6.41 2.81)%，而沒有用CpG-ODN預處理的HeLa細胞與Jurkat細胞共培養(yǎng)Jurkat細胞凋亡率為(29.23 6.85)%，二者的差別有統(tǒng)計學意義(