CpG-ODN對人膀胱癌細(xì)胞T24的作用以及與化療藥聯(lián)用的藥效研究.pdf

1、目的：
　　作為泌尿系統(tǒng)中常見的腫瘤疾病之一，膀胱癌的發(fā)病率近年來呈現(xiàn)逐漸增長的趨勢。先前的有關(guān)數(shù)據(jù)表明，一種具有特定結(jié)構(gòu)的寡聚脫氧核苷酸（CpG-ODN）對某些腫瘤疾病具有潛在的治療效果。本實驗中，我們主要研究這種特定結(jié)構(gòu)的CpG-ODN對人膀胱癌細(xì)胞T24的影響及相關(guān)作用機制；同時，評價CpG-ODN與化療藥聯(lián)用對藥效的影響，為臨床治療提供實驗基礎(chǔ)。
　　方法：
　　常規(guī)培養(yǎng)T24細(xì)胞，采用MTS法檢測CpG-OD

2、N及其脂質(zhì)體對T24細(xì)胞的體外抑制作用，并探討劑量-時間-效應(yīng)關(guān)系，同時對比CpG-ODN與卡介苗單獨作用的效果以及脂質(zhì)體包裹與否對抑制作用的影響；此外可以通過Real-time PCR法檢測T24細(xì)胞內(nèi)抗凋亡因子Bcl-2在CpG-ODN及其脂質(zhì)體作用后的表達(dá)變化。
　　CpG-ODN與阿霉素（DOX）或五氟尿嘧啶（5-FU）單獨或聯(lián)合體外作用于T24細(xì)胞，采用MTS、Hoechst33258、以及流式細(xì)胞儀等方法分別檢測細(xì)胞活

3、性，觀察細(xì)胞核的形態(tài)變化，分析T24細(xì)胞的凋亡和周期分布情況，再通過Real-time PCR法分析細(xì)胞內(nèi)抗凋亡因子Bcl-2的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　CpG-ODN能夠有效遏制T24細(xì)胞的體外活性，并且呈濃度和時間依賴性，其單獨作用的效果也強于卡介苗，而脂質(zhì)體包裹的CpG-ODN能夠更加顯著的抑制T24細(xì)胞的體外活性。Real-time PCR則檢測到在CpG-ODN及其脂質(zhì)體的作用下，T24細(xì)胞內(nèi)抗凋亡因子Bcl-2

4、 mRNA的表達(dá)都有所下調(diào)，并且脂質(zhì)體組下調(diào)效果更顯著。Bcl-2家族抗凋亡因子與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，Bcl-2的表達(dá)下調(diào)也可以刺激相關(guān)藥物作用于腫瘤細(xì)胞，引起凋亡的發(fā)生。
　　CpG-ODN和DOX單獨作用都可以降低T24細(xì)胞的活性，聯(lián)用后對T24的活性抑制作用減弱。而CpG-ODN與5-FU聯(lián)用后，對T24細(xì)胞的體外活性抑制效果強于二者單獨作用，并可以進一步促進細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯于S期，同時抗凋亡因子Bcl-2 m

5、RNA的表達(dá)量更少。
　　結(jié)論：
　　CpG-ODN能夠有效降低T24細(xì)胞的體外活性，原因之一是下調(diào)抗凋亡因子Bcl-2的表達(dá)從而減少細(xì)胞增殖。脂質(zhì)體包裹的CpG-ODN抑制作用更強。CpG-ODN并非是所有化療藥的增敏劑，與DOX聯(lián)用后效果低于DOX單獨使用，而與5-FU聯(lián)用則產(chǎn)生促進作用，能夠進一步誘導(dǎo)T24細(xì)胞凋亡，影響細(xì)胞周期，并顯著下調(diào)Bcl-2的表達(dá)。綜合看來，CpG-ODN有望成為治療膀胱癌的新型小分子核酸藥物