奶牛瘤胃、土壤和飼糧來源兼性厭氧纖維素菌的比較研究.pdf

1、本試驗從瘤胃液(L)、瘤胃飼料殘渣(N)、土壤(T)和日糧(S)分離兼性纖維降解菌，通過常規(guī)和分子生物學(xué)方法對菌株進(jìn)行鑒定，并測定菌株的纖維素酶活性。其目的是比較瘤胃內(nèi)容物等來源纖維素分解菌的屬性和纖維素酶活性;為認(rèn)識和利用瘤胃兼性厭氧纖維分解菌提供試驗數(shù)據(jù)。
　　試驗一纖維素分解菌的分離和鑒定
　　采用羧甲基纖維素平板法初篩纖維分解菌。為了獲得兼性厭氧菌，培養(yǎng)過程為厭氧和有氧方式進(jìn)行。通過剛果紅平板法測定初篩菌株分解纖維素

2、的能力。通過細(xì)菌的形態(tài)學(xué)特征、生理生化特性以及16 SrDNA序列分析對菌株進(jìn)行鑒定。
　　結(jié)果表明:從瘤胃內(nèi)容物、土壤和日糧共分離出29株兼性纖維素分解菌，其中6株的分解纖維素能力比較強(透明圈直徑ψ≥10 mm)。依16 SrDNA序列，25株為桿菌屬，包括12株特基拉芽孢桿菌（瘤胃液中2株、瘤胃殘渣中4株、日糧中5株、土壤中1株）、7株甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌（瘤胃液中2株、瘤胃殘渣中2株、土壤中3株）、5株為解淀粉芽孢桿菌（殘渣

3、中3株、日糧中1株、土壤中1株）和1株地衣芽孢桿菌（來源于瘤胃液）。然而，只有2株為不動桿菌屬（來自瘤胃液和土壤各1株）。
　　試驗二纖維素分解菌產(chǎn)纖維素酶活力的測定
　　在50 mL三角瓶中裝入5 mL的產(chǎn)酶培養(yǎng)基，再加入1mL種子液（含有純化的菌），然后置于39℃、220r·min-1搖床培養(yǎng)48 h，采用3，5-二硝基水楊酸的方法來測定還原糖的生成量，計算纖維素酶活性。
　　結(jié)果表明:來源不同的菌株酶間濾紙酶活表

4、現(xiàn)出一定差異:瘤胃液L5、L7和瘤胃殘渣N5濾紙酶活高于土壤T1和日糧S6(P＜0.05)，瘤胃殘渣N9濾紙酶活高于S1(P＜0.05);S6濾紙酶活性顯著高于T1(P＜0.05); L5酶活性高于其它菌株（P＜0.05）。來源不同的菌株間CMC酶活表現(xiàn)與濾紙酶活類似:瘤胃內(nèi)容物L(fēng)5、L7、N5和瘤胃內(nèi)容物N9菌株CMC酶活均高于土壤T1和日糧S6(P＜0.05); L5CMC酶活性高于其它菌株(P＜0.05);日糧S6菌株和土壤T1菌

5、株的CMC酶活無顯著差異（P＞0.05）。對于來源不同的菌株間β-葡萄糖苷酶活性而言，除了瘤胃液來源L5和日糧來源S6菌株之間無顯著差異(P＞0.05)外，其它各菌株之間活性顯著差異(P＜0.05)。
　　綜上所述:
　　(1)從瘤胃液、瘤胃飼料殘渣、土壤和日糧分離到的29株菌均為兼性厭氧菌。
　　(2)從土壤和日糧中都分離到了與瘤胃內(nèi)容物中同一種屬的菌種，表明瘤胃內(nèi)容物中的纖維素分解菌可能是隨外界的土壤或日糧進(jìn)入瘤胃