奶牛瘤胃、土壤和飼糧來源兼性厭氧固氮菌的比較研究.pdf

1、隨著對生物固氮研究的不斷擴(kuò)展和深入，對自生固氮菌的研究變得越來越得到重視。本試驗(yàn)從土壤、飼料、奶牛瘤胃殘?jiān)土鑫敢褐蟹蛛x得到兼性厭氧固氮菌，系統(tǒng)地進(jìn)行理化性質(zhì)和種屬關(guān)系的鑒定，旨在研究從土壤、飼料和瘤胃殘?jiān)蟹蛛x到與從瘤胃液中分離到的相同種屬關(guān)系的菌株，探討瘤胃液中固氮菌的獨(dú)有性，為今后瘤胃固氮菌的研究提供相關(guān)的參考依據(jù)。
　　本試驗(yàn)通過采集土壤、日糧飼料和3頭荷斯坦奶牛的瘤胃液和瘤胃殘?jiān)鳛榫甑膩碓礃颖荆ㄟ^固體無氮培養(yǎng)基在3

2、9℃溫度下，采用先無氧后有氧的條件進(jìn)行分離和純化兼性厭氧固氮菌。對獲得的菌株，采用乙炔還原法測定固氮酶活性，并進(jìn)行系統(tǒng)的生理生化鑒定和使用16S rDNA技術(shù)進(jìn)行分子測序鑒定?；诠痰富钚裕砩再|(zhì)和16S rDNA分子測序指標(biāo)，對不同來源菌株進(jìn)行分析比較。
　　試驗(yàn)結(jié)果表明:從瘤胃液、瘤胃殘?jiān)⑷占Z飼料和土壤這4種來源中總共分離得到30株菌株，其中以瘤胃液為來源篩選出9株菌株（編號(hào)為LY-1到LY-9），以瘤胃殘?jiān)鼮閬碓春Y

3、選出7株菌株（編號(hào)為LC-1到LC-7），以日糧飼料為來源篩選出7株菌株(編號(hào)為SL-1到SL-7)，以土壤為來源篩選出7株菌株（編號(hào)為TR-1到TR-7）。經(jīng)鑒定這30株菌株均為兼性厭氧細(xì)菌。
　　從固氮酶活性的結(jié)果中對比發(fā)現(xiàn)，這30株菌中固氮酶活性最高的為土壤的TR-2，其固氮酶活性為97.0523 nmol·mg-1·h-1，且土壤來源菌株的固氮酶活普遍高于其他3種來源;將瘤胃殘?jiān)械木昱c瘤胃液中的對比發(fā)現(xiàn)，瘤胃殘?jiān)械墓?/p>

4、氮菌酶活性相對于瘤胃液中的普遍要高，但兩種來源中固氮酶活性相對較高的一株卻是來自瘤胃液的LY-1，達(dá)到40.7075nmol·mg-1·h-1。
　　對符合測序要求的25株固氮菌進(jìn)行分子測序，從結(jié)果來看，以瘤胃液為來源分離到的9株固氮菌中，有3株鮑氏不動(dòng)桿菌，1株甲基營養(yǎng)性芽孢桿菌，3株索諾拉沙漠芽孢桿菌，1株空氣芽孢桿菌新亞種和1株山羊葡萄球菌;以瘤胃殘?jiān)鼮閬碓捶蛛x到的4株固氮菌中，有2株索諾拉沙漠芽孢桿菌，1株乙酸鈣不動(dòng)桿菌新

5、亞種，1株枝芽胞菌新亞種;以飼料為來源分離到的6株固氮菌中，有5株索諾拉沙漠芽孢桿菌和1株空氣芽孢桿菌新亞種;以土壤為來源分離到的6株固氮菌中，有3株索諾拉沙漠芽孢桿菌，1株甲基營養(yǎng)性芽孢桿菌，1株山羊葡萄球菌和1株空氣芽孢桿菌新亞種。進(jìn)行對比發(fā)現(xiàn)，來自瘤胃殘?jiān)械腖C-4和LC-7、來自土壤的TR-4、TR-5和TR-6和來自飼料的SL-1、SL-2、SL-3、SL-6和SL-7都與來自瘤胃液中的LY-3、LY-8和LY-9為相同種屬

6、的菌株;來自土壤的TR-1與來自瘤胃液的LY-1為相同種屬的菌株;來自土壤的TR-2與來自瘤胃液的LY-4為相同種屬的菌株;來自土壤的TR-3和來自飼料的SL-5雖然與瘤胃液中的LY-3的最近種屬都為空氣芽孢桿菌，但菌株的相似度都只有40％多，不能說明這幾種菌株為同一種屬。
　　綜合以上來看，在瘤胃中確實(shí)存在一定數(shù)量的兼性厭氧固氮菌，且在瘤胃殘?jiān)械耐N菌屬固氮酶活性更高，發(fā)揮更大的作用。在鑒定種屬關(guān)系中，從瘤胃殘?jiān)?，土壤和飼料?/p>