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文檔簡介
1、隨著對生物固氮研究的不斷擴(kuò)展和深入,對自生固氮菌的研究變得越來越得到重視。本試驗(yàn)從土壤、飼料、奶牛瘤胃殘?jiān)土鑫敢褐蟹蛛x得到兼性厭氧固氮菌,系統(tǒng)地進(jìn)行理化性質(zhì)和種屬關(guān)系的鑒定,旨在研究從土壤、飼料和瘤胃殘?jiān)蟹蛛x到與從瘤胃液中分離到的相同種屬關(guān)系的菌株,探討瘤胃液中固氮菌的獨(dú)有性,為今后瘤胃固氮菌的研究提供相關(guān)的參考依據(jù)。
本試驗(yàn)通過采集土壤、日糧飼料和3頭荷斯坦奶牛的瘤胃液和瘤胃殘?jiān)鳛榫甑膩碓礃颖荆ㄟ^固體無氮培養(yǎng)基在3
2、9℃溫度下,采用先無氧后有氧的條件進(jìn)行分離和純化兼性厭氧固氮菌。對獲得的菌株,采用乙炔還原法測定固氮酶活性,并進(jìn)行系統(tǒng)的生理生化鑒定和使用16S rDNA技術(shù)進(jìn)行分子測序鑒定?;诠痰富钚裕砩再|(zhì)和16S rDNA分子測序指標(biāo),對不同來源菌株進(jìn)行分析比較。
試驗(yàn)結(jié)果表明:從瘤胃液、瘤胃殘?jiān)⑷占Z飼料和土壤這4種來源中總共分離得到30株菌株,其中以瘤胃液為來源篩選出9株菌株(編號(hào)為LY-1到LY-9),以瘤胃殘?jiān)鼮閬碓春Y
3、選出7株菌株(編號(hào)為LC-1到LC-7),以日糧飼料為來源篩選出7株菌株(編號(hào)為SL-1到SL-7),以土壤為來源篩選出7株菌株(編號(hào)為TR-1到TR-7)。經(jīng)鑒定這30株菌株均為兼性厭氧細(xì)菌。
從固氮酶活性的結(jié)果中對比發(fā)現(xiàn),這30株菌中固氮酶活性最高的為土壤的TR-2,其固氮酶活性為97.0523 nmol·mg-1·h-1,且土壤來源菌株的固氮酶活普遍高于其他3種來源;將瘤胃殘?jiān)械木昱c瘤胃液中的對比發(fā)現(xiàn),瘤胃殘?jiān)械墓?/p>
4、氮菌酶活性相對于瘤胃液中的普遍要高,但兩種來源中固氮酶活性相對較高的一株卻是來自瘤胃液的LY-1,達(dá)到40.7075nmol·mg-1·h-1。
對符合測序要求的25株固氮菌進(jìn)行分子測序,從結(jié)果來看,以瘤胃液為來源分離到的9株固氮菌中,有3株鮑氏不動(dòng)桿菌,1株甲基營養(yǎng)性芽孢桿菌,3株索諾拉沙漠芽孢桿菌,1株空氣芽孢桿菌新亞種和1株山羊葡萄球菌;以瘤胃殘?jiān)鼮閬碓捶蛛x到的4株固氮菌中,有2株索諾拉沙漠芽孢桿菌,1株乙酸鈣不動(dòng)桿菌新
5、亞種,1株枝芽胞菌新亞種;以飼料為來源分離到的6株固氮菌中,有5株索諾拉沙漠芽孢桿菌和1株空氣芽孢桿菌新亞種;以土壤為來源分離到的6株固氮菌中,有3株索諾拉沙漠芽孢桿菌,1株甲基營養(yǎng)性芽孢桿菌,1株山羊葡萄球菌和1株空氣芽孢桿菌新亞種。進(jìn)行對比發(fā)現(xiàn),來自瘤胃殘?jiān)械腖C-4和LC-7、來自土壤的TR-4、TR-5和TR-6和來自飼料的SL-1、SL-2、SL-3、SL-6和SL-7都與來自瘤胃液中的LY-3、LY-8和LY-9為相同種屬
6、的菌株;來自土壤的TR-1與來自瘤胃液的LY-1為相同種屬的菌株;來自土壤的TR-2與來自瘤胃液的LY-4為相同種屬的菌株;來自土壤的TR-3和來自飼料的SL-5雖然與瘤胃液中的LY-3的最近種屬都為空氣芽孢桿菌,但菌株的相似度都只有40%多,不能說明這幾種菌株為同一種屬。
綜合以上來看,在瘤胃中確實(shí)存在一定數(shù)量的兼性厭氧固氮菌,且在瘤胃殘?jiān)械耐N菌屬固氮酶活性更高,發(fā)揮更大的作用。在鑒定種屬關(guān)系中,從瘤胃殘?jiān)?,土壤和飼料?/p>
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