產(chǎn)纖維素酶兼性厭氧芽孢桿菌的分離篩選及在動(dòng)物生產(chǎn)上的初步應(yīng)用.pdf

1、本研究是為了篩選出產(chǎn)纖維素酶活性較高、而對(duì)氧氣需求不高的兼性厭氧芽孢桿菌。試驗(yàn)以新鮮奶牛糞便為樣品，利用芽孢桿菌耐高溫的特性，經(jīng)80℃水浴殺死非芽孢菌，從而分離篩選出一批芽孢桿菌。采用剛果紅平板染色法，并通過(guò)對(duì)透明圈的測(cè)定和計(jì)算，選出13株具有較高纖維素酶活性的菌株。在對(duì)這批菌株進(jìn)行生理生化鑒定的基礎(chǔ)上，選出一株產(chǎn)纖維素酶活性較高、兼性厭氧梭狀芽孢桿菌。將其制成菌懸液，按0.5ml/只的劑量，腹腔注射平均體重20g的小鼠，測(cè)定出對(duì)小鼠的

2、半數(shù)致死量為2.3×10<'10>/ml，按每克日糧中活菌(或孢子)數(shù)為2×10<'5>～10<'6>個(gè)的標(biāo)準(zhǔn)，證實(shí)該菌株添加到動(dòng)物日糧中具有較高的安全性。 對(duì)篩選出的菌株進(jìn)行產(chǎn)纖維素酶條件的研究，測(cè)定影響細(xì)菌產(chǎn)酶的幾種主要因素(碳源、氮源、發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間、培養(yǎng)基初始PH、接種量)在不同條件下對(duì)酶活力的影響，從而篩選出最適產(chǎn)酶條件。首先分別測(cè)定單因素條件下每種因素對(duì)纖維素酶活的影響，根據(jù)單因素條件下的測(cè)定結(jié)果，設(shè)計(jì)6因素三水

3、平正交試驗(yàn)(L<,27>(3<'13>))對(duì)其產(chǎn)酶條件進(jìn)行了優(yōu)化，從而篩選出最佳發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)條件為：碳源：麩皮1％，氮源：牛肉膏2％，初始pH：8，發(fā)酵溫度：42℃，發(fā)酵時(shí)間：36h，接種量3％。 將篩選出的菌株制成活菌制劑，選用24只生理指標(biāo)基本一致的斷奶家兔進(jìn)行飼喂試驗(yàn)，試驗(yàn)分對(duì)照組(基礎(chǔ)日糧)和實(shí)驗(yàn)組(添加活菌制劑)，飼喂30天后，計(jì)算增重情況和飼料報(bào)酬，測(cè)定糞便和不同腸段中纖維素酶、蛋白酶、淀粉酶活性，比較兩組間差異性。

4、 結(jié)果表明，試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，兩組間增重效果和料重比均有明顯差異，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析差異極顯著(P<0.05)。其中，試驗(yàn)組日增重比對(duì)照組提高7.91g/只，而料重比下降了15.2％，說(shuō)明在家兔日糧中添加由分離菌株制成的活菌制劑后，有明顯的促生長(zhǎng)作用，而且試驗(yàn)組曰糧得到了更有效的消化吸收。 酶活力的測(cè)定結(jié)果表明：糞便及腸道中纖維素酶活力有明顯提高，試驗(yàn)組與對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)。蛋白酶活力則無(wú)明顯變化，試驗(yàn)組與對(duì)照組