纖維素降解菌的篩選和纖維素酶基因的克隆表達(dá).pdf

1、纖維素是地球上含量最多的可再生資源,然而由于一些關(guān)鍵技術(shù)瓶頸造成了纖維素資源沒有得到充分的利用,并且由于纖維素的燃燒、堆積等造成了環(huán)境的污染。隨著資源的緊張、對(duì)環(huán)境問題的重視,人們對(duì)纖維素酶研究的投入也在加大。我們希望通過我們的力量,對(duì)纖維素酶的基礎(chǔ)研究能夠做出一定的貢獻(xiàn)。
　　 本研究先通過摸索建立了適合本研究的纖維素降解菌的篩選模型,并利用此模型篩選出了9株纖維素降解真菌,經(jīng)過濾紙條崩解實(shí)驗(yàn)和cellulose-azure降

2、解實(shí)驗(yàn)復(fù)篩,最后得到了2株降解纖維素比較好的纖維素降解菌。
　　 通過分子生物學(xué)的方法,對(duì)這2株纖維素降解菌進(jìn)行的鑒定。PCR擴(kuò)增菌株的18SrDNA,進(jìn)行序列的比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建。經(jīng)過鑒定這2株菌分別為紫青霉(Penicillium purpurogenum)和煙曲霉(Aspergillus fumigatus)。并對(duì)這2株菌所產(chǎn)的纖維素酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了初探,測定酶活、溫度和PH值對(duì)酶學(xué)性質(zhì)的影響。這2株真菌的內(nèi)切酶活性

3、在液體培養(yǎng)基發(fā)酵條件下的酶活性分別為1.06IU、0.81IU,外切酶活性0.71IU、0.19IU。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)煙曲霉纖維二糖酶可以耐受70℃的高溫,在酸性條件下可以起作用基本上可以看作是在極端條件下能夠起作用的酶。
　　 緊接著,我們克隆了煙曲霉纖維二糖水解酶CBH基因到PET28(a)表達(dá)載體上。并轉(zhuǎn)入到大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行表達(dá)。通過SDS-PAGE電泳分析,獲得52KDa表達(dá)蛋白,與所預(yù)測的蛋白大小相符合。對(duì)