口服型生長抑素基因疫苗對小鼠腸道局部免疫效果的研究.pdf

1、口服型生長抑素(Somatostatin，SS)基因疫苗是將pcDNA3.1-HBs／SS質(zhì)粒導(dǎo)入減毒沙門氏菌(SL7207)中構(gòu)建而成。該疫苗進入體內(nèi)能迅速裂解釋放質(zhì)粒，表達乙肝表面抗原／生長抑素(HBs／SS)的融合蛋白，刺激機體產(chǎn)生SS抗體以中和SS，解除SS對生長的抑制作用，促進動物生長。該疫苗具有成本低廉、使用方便、安全性好等特點，有利于在實際生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。本論文首先對疫苗的安全性以及細菌在體內(nèi)的分布進行了檢測，然后闡明了該

2、疫苗對小鼠生長發(fā)育的影響，最后就該疫苗表達融合蛋白的情況和對腸道免疫功能的影響進行了詳細研究。 口服型SS基因疫苗的安全陛測定如下：30只健康的4 周齡雌性小鼠，隨機分為試驗組Ⅰ、試驗組Ⅱ和對照組。試驗組Ⅰ灌胃給予疫苗菌液10<'9>CFU／只(CFU：菌落形成單位)，試驗組Ⅱ給予菌液10<'8>CFU／只，對照組給予200μLPBS。觀察15天，1周后剖解部分小鼠。結(jié)果顯示，試驗組Ⅱ小鼠未見明顯不良反應(yīng)，剖解后內(nèi)臟無明顯病變。

3、說明該疫苗在10<'8>CFU／7,的劑量下安全性較好。 150只4周齡雌性小鼠，隨機分為3個試驗組。試驗組Ⅰ首次免疫后2、4周分別加強免疫一次，首次免疫劑量為灌胃菌液10<'8>CFU／只(200μL)，加強免疫劑量同首次免疫；試驗組Ⅱ為首次免疫后第2、3天分別加強免疫一次，免疫劑量同試驗組Ⅰ：試驗組Ⅲ為對照組，口服PBS 3次，每次200μL。 減毒沙門氏菌在體內(nèi)分布情況：首次免疫后8天內(nèi)不同時間段各宰殺小鼠2只，采

4、腸道和肝脾各組織進行觸片，姬姆薩染色觀察菌體在組織中的分布情況。結(jié)果顯示，口腔灌服疫苗菌液24 h內(nèi)空腸中細菌數(shù)量明顯增多，脾臟中在免疫后第4天發(fā)現(xiàn)細菌，肝臟在感染后始終未發(fā)現(xiàn)細菌。推測免疫后進入腸道中的細菌可能一部分被分解，一部分被腸道吞噬細胞攝取轉(zhuǎn)運至次級淋巴器官后誘導(dǎo)局部黏膜免疫和全身免疫反應(yīng)。 口服型SS基因疫苗對小鼠生長發(fā)育的影響：從首次免疫開始每周每組取10只小鼠稱重，觀察小鼠體重變化。結(jié)果顯示，兩個試驗組小鼠免疫后

5、體重有一定增加，其中試驗組Ⅱ增重效果較好，但因觀察時間太短，增重效果尚未達到顯著水平。 口服型SS基因疫苗在體內(nèi)表達融合蛋白的檢測：首次免疫后于第3、5和7周每組撲殺小鼠8只，應(yīng)用親和免疫組化的方法(ABC法)分別顯示十二指腸和空腸中乙肝表面抗原(HBsAg)陽性細胞和生長抑素(SS)陽性細胞的分布及數(shù)量變化。結(jié)果顯示，首次免疫后第3周試驗組I和試驗組II小腸內(nèi)出現(xiàn)HBsAg陽性細胞并維持到第7周；首次免疫后第5周和第7周兩個試

6、驗組小腸內(nèi)SS陽性細胞數(shù)量比對照組極顯著減少(P<0.01)。結(jié)果證明，口服型SS基因疫苗免疫小鼠后小腸固有層及上皮中一些細胞可表達HBsAg/ss融合蛋白，同時SS陽性細胞數(shù)量也減少，推測該基因疫苗刺激機體表達蛋白后能產(chǎn)生SS抗體。口服型SS基因疫苗對小鼠腸道局部細胞免疫的影響：應(yīng)用HE染色、親和免疫組化(ABC法)、甲苯胺藍染色的方法分別顯示小腸上皮內(nèi)淋巴細胞(iIEL)、固有層CD4<,+>T細胞和肥大細胞的分布及數(shù)量變化。結(jié)果表