生長抑素聯(lián)合清胰湯對腸道白色念珠菌感染小鼠的實驗性研究.pdf

1、目的:
　　利用生長抑素（Somatostatin，SST）聯(lián)合中藥清胰湯合劑（QingYitang,QYT）干預腸道白色念珠菌感染的小鼠，觀察腸道組織中HE染色、腸道組織病理學評分、CFU菌落計數(shù)、用Tunel法及免疫組化技術檢測腸道組織凋亡細胞及凋亡基因Bax、Bcl-2的表達，對比采用單一及聯(lián)合應用生長抑素和中藥清胰湯合劑進行干預，研究探討其對其腸粘膜屏障保護作用的可能機制。
　　方法
　　取健康SPF級（Spe

2、cefic pathogen Free,無特定病原體）昆明雌性小鼠100只，體重18-20g，4周齡，采用隨機分組方式抽取20只為空白對照組（N）；80只用于建造腸道白色念珠菌感染造模組，分組后各組小鼠的體重無明顯差異。兩周后，從正常對照組及造模組中各隨機抽取5只小鼠，取其腸道組織行CFU菌落及時、HE染色并光學顯微鏡下觀察，證實腸道感染白色念珠菌模型成功。將造模組剩余的64只小鼠（造模期間死亡11只）采用隨機分組方式分成模型組及實驗組

3、（生長抑素組、清胰湯、聯(lián)合用藥組），分別進行藥物干預治療。生長抑素組小鼠給予濃度為0.08mg/ml生長抑素尾靜脈注射，0.2ml/只，Q6h；清胰湯組小鼠給予清胰湯灌胃0.5ml/只,Q6h；生長抑素+清胰湯聯(lián)合用藥組小鼠按前述方法同時等量給藥；空白對照組及模型組在同一時間給予等量生理鹽水尾靜脈注射或灌胃；藥物等量持續(xù)干預7天，連續(xù)觀察小鼠一般情況；干預治療后及空白對照小鼠，采用頸椎脫臼法將其處死，無菌取出小鼠的回腸末端、回盲部及右半

4、結腸部分的腸道組織進行HE鏡下觀、腸道內容物的白色念珠菌菌落計數(shù)、腸道組織病理學評分、用Tunel法及免疫組化技術檢測腸道組織凋亡細胞及凋亡基因Bax、Bcl-2的表達，同時采用圖像分析系統(tǒng)對其結果進行量化分析。所有實驗數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標準差（x±S）的方式表示，結合SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行分析。
　　結果
　　1、模型成功率為86.25％。
　　2、一般情況：大體觀察可見空白對照組小鼠一般情況好，活潑好動、毛發(fā)有

5、光澤；模型組小鼠可見精神差、飲食減少、基本不活動、毛發(fā)散亂、無光澤等；治療組小鼠精神較好，稍有活動，毛發(fā)稍有光澤；麻醉消毒，打開腹腔后，發(fā)現(xiàn)空白對照組小鼠腸道組織無明顯異常，組織紅潤，腸蠕動功能正常；而模型組小鼠出現(xiàn)腸管壁充血及水腫、部分有腸管壞死，腸腔脹氣，腹腔有少量暗紅色積液；治療組小鼠為腸道組織顏色稍紅潤，管壁稍有充血及水腫，腸腔脹氣消失。
　　3、腸道內容物白色念珠菌菌落（CFU）計數(shù)情況：空白對照組、模型組、生長抑素組、

6、清胰湯組、聯(lián)合用藥組腸道內容物均出現(xiàn)不同程度的白色念珠菌生長，在科瑪嘉培養(yǎng)基上呈現(xiàn)翠綠色的光滑菌落；通過菌落培養(yǎng)計數(shù)，證實白色念珠菌菌落計數(shù)與空白對照組相比，模型組明顯增多（P<0.05），藥物干預后，治療組的菌落計數(shù)均有不同程度下降，有差異性（P<0.05），以聯(lián)合用藥組最為顯著（P<0.05）。
　　4、病理學檢測及病理學評分：光學顯微鏡下空白對照組小鼠腸道組織腺體結構排列整齊、完整，粘膜及粘膜下層無毛細血管淤血、腺體腫脹、炎

7、癥細胞聚集、彌散分布等特點；模型組小鼠腸道組織可見上皮下間隙增大，粘膜及粘膜下充血腫脹，腺體排列紊亂，毛細血管及微小靜脈擴張充血，腸粘膜細胞壞死、脫落，可見炎性細胞聚集、浸潤，病理學評分結果證實，兩組相比有顯著的差異性（P<0.05）。藥物干預后，治療組粘膜層及粘膜下層、固有層間隙變小，腺體排列稍整齊，血管稍有擴張，脫落及壞死減輕，可見少量炎性細胞在腸腔內存在，病理學評分結果以聯(lián)合用藥組最為顯著（P<0.05）。
　　5、腸道粘膜

8、細胞的凋亡檢測及凋亡指數(shù)：腸粘膜凋亡檢測細胞表達部位在細胞核處，陽性細胞表達?？瞻讓φ战M可見少量凋亡細胞，模型組小鼠粘膜細胞可見細胞體積縮小、變形，與周圍的細胞間隙增大，胞質濃縮、胞膜裂解成塊狀，嚴重者可見以凋亡小體形成等特點的凋亡細胞，細胞核中呈現(xiàn)棕黃色或黃褐色。藥物干預后，在腸道組織病理學評分中凋亡細胞的表達有不同的減輕，與模型組相比有顯著差異性（P<0.05）；藥物干預后，凋亡細胞有不同程度的表達，以聯(lián)合用藥組差異最為顯著（P<0

9、.05）。
　　6、腸粘膜凋亡基因Bax表達：Bax表達部位在包漿處，主要分布于粘膜細胞層及腺體，呈棕黃色陽性細胞表達，有時呈彌散性分布的特點。與空白對照組相比，模型組的Bax表達有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。治療組與模型組相比，Bax表達均有不同程度表達，但它們之間無明顯統(tǒng)計學意義（P﹥0.05）。
　　7、腸粘膜凋亡基因Bcl-2表達：Bcl-2表達部位在包漿處，主要分布于粘膜細胞層及腺體，呈棕黃色陽性細胞表達。與空白對