利用孕婦外周血中胎兒有核紅細(xì)胞無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷先天性弓形蟲感染的研究.pdf

1、目的: 利用顯微操作技術(shù)分離母血中的單個胎兒有核紅細(xì)胞（fetal nucleated read blood cells，F(xiàn)NRBC），探索利用單個胎兒有核紅細(xì)胞進(jìn)行無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷胎兒先天性弓形蟲感染(congenital Toxoplasma iNFection)的可行性。
　　 方法: 以顯微操作分離法獲取孕婦外周血中的單個胎兒細(xì)胞。標(biāo)本選自58例外周血弓形蟲（Toxoplasma，TOX）IgM陽性、孕期6～27周的孕婦，

2、均取肘前靜脈血5ml，密度剃度離心法富集單個核細(xì)胞層制成涂片。瑞氏染色后400倍倒置顯微鏡下觀察、定位、計數(shù)并以直徑20～30um的毛細(xì)吸管針挑取單個有核紅細(xì)胞。堿變性法提取單細(xì)胞DNA，采用引物延伸預(yù)擴(kuò)增（primed extension preamplification，PEP)和聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）技術(shù)檢測SRY基因和TOX B1基因。FNRBC的TOX B1基因陽性可確診為先

3、天性弓形蟲感染。
　　 結(jié)果: FNRBC瑞氏染色的形態(tài)學(xué)特征鮮明，易于識別。58例母血均取自早孕和中孕孕婦，每例觀察到2～12個FNRBC，早孕組和中孕組的FNRBC數(shù)目分別為3.20±1.15，7. 86±2.42，二組之間具有極顯著差異（P<0.05），以中孕組最高。健康未孕婦女外周血中均未觀察到FNRBC。對胎兒NRBC進(jìn)行SRY基因的PEP-PCR分析，32例男胎檢測到SRY基因陽性者30例，檢出率為93.75％(30

4、/32)；26例女胎標(biāo)本無一例檢測出SRY基因，未檢出率為100％（26/26），此方法判斷胎兒性別準(zhǔn)確率為96.55%(56/58)。58例TOX IgM陽性的孕婦，其中5例證實有先天性弓形蟲感染，垂直感染率為8.6％（5/58）。采用PEP-PCR技術(shù)成功檢測到一例FNRBC中B1基因陽性，即診斷為先天性弓形蟲感染，該方法的準(zhǔn)確率為20％（1/5）、檢出率為1.72％（1/58）。
　　 結(jié)論: 顯微操作技術(shù)結(jié)合瑞氏染色法，