懷有先天性心臟病胎兒孕婦血漿microRNA的表達(dá)差異.pdf

1、研究背景：
　　先天性心臟?。╟ongenital heart disease CHD）是引起嬰幼兒殘疾或死亡中最常見的出生缺陷，簡稱為先心病，雖然在近20年來對于先天性心臟病的診治水平已經(jīng)有了很大的提高，但無可否認(rèn)的是，其發(fā)病率依然是居高不下，而其中一部分的術(shù)后存活者，仍會遺留有下相當(dāng)高的并發(fā)癥和死亡率，導(dǎo)致個人及家庭的生活質(zhì)量嚴(yán)重下降。粗略統(tǒng)計，我國每年先心病的手術(shù)量約為4萬多例，其中復(fù)雜性的先心臟的比例高達(dá)20％，因此，我國

2、每年先天性心臟病的診療費可至少達(dá)120億元，多數(shù)為手術(shù)及其康復(fù)所需費用。
　　對我國目前的狀況而言，先心病的產(chǎn)前篩查基本依靠中孕期甚至晚孕期的胎兒超聲心臟超聲檢查。然而目前通常先心病的產(chǎn)前檢出率較低與較遲，這就致使先心病的出生率和流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)率居高不下，預(yù)后不良型先心病出生率未得到有效控制，同時由于一些可治愈性的CHD由于沒有在產(chǎn)前得到早期的診斷，而失去了在新生兒時期或者嬰幼兒期的早期治療機會。
　　MicroRNA(m

3、iRNA)是一類非編碼的小分子的單鏈RNA，其可以通過調(diào)節(jié)蛋白編碼基因的表達(dá)，從而起到對不同的細(xì)胞發(fā)育過程起著重要調(diào)控作用的目的，而miRNA的表達(dá)異?？赡軙?dǎo)致生理或心理的某些異?；蛘吣承┘膊〉漠a(chǎn)生。而目前研究發(fā)現(xiàn)，循環(huán)miRNA可以豐富而穩(wěn)定的存在于各種體液，在身心異?；蛘呤羌膊顟B(tài)下，循環(huán)miRNA的表達(dá)譜可能有特征性的改變，因此可作為一種無創(chuàng)傷性的生物標(biāo)志物用于疾病的預(yù)測、診斷和預(yù)后的評估。目前在冠心病、心力衰竭等心血管疾病中已

4、開展循環(huán)miRNA的研究，并且取得相當(dāng)大的進(jìn)展。
　　故目前的研究已經(jīng)表明miRNA在診斷和治療心臟相關(guān)疾病中的前景。因此孕婦的血漿miRNA可被認(rèn)為是胎兒先天性心臟病產(chǎn)前診斷良好的無創(chuàng)性標(biāo)志物，并有可能為先心臟相關(guān)的診斷、治療和預(yù)后評估提供新的靶點。
　　目的：
　　使用Solexa測序，檢測血漿miRNA在懷有先天性心臟病胎兒的孕婦和懷有正常心臟胎兒的孕婦之間的表達(dá)差異,篩選出表達(dá)顯著差異的miRNAs，為產(chǎn)前篩查

5、先心病提供生物標(biāo)記物和為先心病的發(fā)生機制研究提供分子生物學(xué)依據(jù)。
　　對象與方法：
　　1.研究對象
　　選擇2013年4月-2014年5月在廣東省人民醫(yī)院廣東省心血管病研究所心兒科彩超室確診為懷有各種先心病胎兒的孕婦60例為病例組，2013年4月-2014年5月在廣東省人民醫(yī)院產(chǎn)科門診確診為懷有正常心臟胎兒的孕婦60例為對照組，兩組研究者的孕周、年齡相匹配。
　　2.研究方法
　　收集病例組和對照組中各6

6、0例研究者的血漿，病例組的血漿組成一個樣本池，對照組的血漿組成另一個樣本池，各提取這兩樣本池的血漿miRNA，在兩樣品混合池（pool）中，用Solexa測序方法篩選出具有顯著差異性的血漿miRNA；
　　結(jié)果：
　　篩選懷有先心病胎兒的孕婦表達(dá)差異的特異性血漿miRNA
　　Solexa測序結(jié)果顯示，在病例組及對照組中分別檢測出545個及580個miRNA的表達(dá)，以拷貝數(shù)≥30，病例組與對照組相比miRNA表達(dá)差異倍

7、數(shù)≥9為標(biāo)準(zhǔn)，篩選出7個表達(dá)上調(diào)的 miRNA：hsa-miR-137、hsa-miR-206、hsa-miR-224-3p、 hsa-miR-34a-3p、 hsa-miR-485-3p、 hsa-miR-5094、hsa-miR-653-3p；4個表達(dá)下調(diào)的miRNA：hsa-miR-100-3p、hsa-miR-188-5p、hsa-miR-190a-3p、hsa-miR-216a-5p。
　　結(jié)論：
　　1、懷有先心