孕婦外周血胎兒有核紅細胞數(shù)與胎兒及胎盤異常關系

1、<p>　　孕婦外周血胎兒有核紅細胞數(shù)與胎兒及胎盤異常關系</p><p>　　作者：楊曉菊 徐金娥 趙金霞 楊宗利 劉晶 </p><p>　　【摘要】 目的 探討在胎盤和胎兒發(fā)生病理性變化時,母血中胎兒有核紅細胞(FNRBC)數(shù)量的變化,為母血中FNRBC計數(shù)在無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷中的應用提供理論基礎和實驗依據(jù)。方法 對110例8～40孕周的婦女(60例正常妊娠,30例病理妊娠,

2、20例胎兒異常)外周血進行單密度梯度離心,瑞氏染色和細胞計數(shù),分析母血中FNRBC數(shù)量在病理妊娠和胎兒異常時的變化及其與孕周的關系。對有胎兒異?？赡艿牟±?，孕早期(8～12周)自然流產(chǎn)者行絨毛細胞核型分析，孕中期(13～24周)及晚期(25周以上)取流產(chǎn)兒和新生兒血進行染色體分析。結果 正常妊娠時，母血中FNRBC平均數(shù)量為(10.20±8.11)×103/L，病理妊娠和胎兒異常時母血中FNRBC平均數(shù)量為(23.0

3、9±12.42)×103/L和(38.93±14.87)×103/L，病理妊娠組和胎兒異常組與正常妊娠組相比差異有顯著性(F=25.927，q=4.236、10.674，P&lt;0.01)。正常妊娠組和病理妊娠組母血中FNRBC數(shù)量與孕周呈正相關(r=0.491、 0.500,P&lt;0.05)。而異常胎兒組母血中FNRBC數(shù)量與孕周無相</p><p>

4、;　　【關鍵詞】 孕婦;胎兒有核紅細胞;產(chǎn)前診斷 </p><p>　　[ABSTRACT] Objective To investigate the changes of the counting of fetal nucleated red blood cells (FNRBC) and their relationship with pathology of fetus and placenta, and

5、 provide rationale and experiment evidence for the application of FNRBC in noninvasive prenatal diagnosis. Methods This study consisted of 110 women with 8-40 weeks of pregnancy (60 with normal pregnancy, 30 with pathop

6、regnancy, and 20 with fetal disorder). Counting of FNRBC in the maternal blood and its relationship with gest</p><p>　　[KEY WORDS] Pregnant women; Fetus nucleated red cell; Prenatal diagnosis </p><

7、;p>　　利用母血中胎兒有核紅細胞(FNRBC)進行胎兒遺傳疾病的產(chǎn)前篩查是近年來新發(fā)展的一項非創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷技術，母血中FNRBC是目前最適合產(chǎn)前診斷的胎兒細胞，當胎盤解剖結構和功能的完整性破壞或母兒免疫異常時，其數(shù)量會發(fā)生異常。本文檢測了不同孕周母血中FNRBC數(shù)量的變化，探討病理妊娠時和胎兒畸形或(和)染色體異常時母血中FNRBC的變化情況，為母血中FNRBC計數(shù)輔助應用于產(chǎn)前預測病理妊娠和產(chǎn)前篩查胎兒畸形提供理論基礎和實驗

8、依據(jù)。 </p><p><b>　　1 對象和方法 </b></p><p><b>　　1.1 研究對象 </b></p><p>　　本院產(chǎn)科門診及住院孕婦110例，孕周8～40周，年齡28～40歲。包括正常妊娠60例;病理妊娠30例，其中子癇前期19例，胎兒宮內發(fā)育遲緩3例，妊娠期糖尿病5例，妊娠心臟病1例，習慣性

9、流產(chǎn)2例;胎兒異常20例，其中死胎5例，神經(jīng)管畸形6例，胃腸道畸形4例，肢體畸形3例，18/21三體2例。病理妊娠診斷按《婦產(chǎn)科學》(第6版)教材標準進行，胎兒異常診斷參照產(chǎn)前B超診斷及染色體檢查結果。排除貧血(HGb&gt;100 g/L)及其他血液病。3組孕婦年齡和產(chǎn)次差異無顯著性(P&gt;0.05)。見表1?！”? 各組孕婦年齡、孕周、產(chǎn)次比較 </p><p>　　1.2 FNRBC檢

10、測方法 </p><p>　　所有病人均在創(chuàng)傷性檢查前采集外周靜脈血10 mL，置于EDTA抗凝管，室溫保存， 6 h內室溫下檢測。用密度為1.085、1.075 kg/L的Percoll細胞分離液在離心管中制成密度梯度，然后將外周血10 mL用生理鹽水等倍稀釋后，緩慢加入。室溫下以3 000 r/min離心30 min，分別收集上、中層分離界面細胞，以生理鹽水洗滌后，制成涂片，瑞氏染色。在光學顯微鏡下觀察FNR

11、BC并計數(shù)。 </p><p>　　1.3 胎盤絨毛細胞核型及胎血染色體分析 </p><p>　　對有胎兒異?？赡艿牟±性缙?8～12周)自然流產(chǎn)者行絨毛細胞核型分析，于孕中期(13～24周)及晚期(25周以上)取流產(chǎn)兒和新生兒血進行染色體分析。另取臍血1份、正常未育未孕婦女外周血標本2份分別作為陽性和陰性對照。 </p><p><b>　　1.4

12、 統(tǒng)計方法 </b></p><p>　　應用SAS 10.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理[1]，結果以±s表示，數(shù)據(jù)間比較采用方差分析，相關性檢驗采用Pearson相關分析。 </p><p><b>　　2 結 果 </b></p><p>　　2.1 正常妊娠、病理妊娠和胎兒異常時母血中的FNRBC計數(shù)比較 </p&

13、gt;<p>　　正常妊娠時，母血中FNRBC平均數(shù)量為(10.20±8.11)×103/L，病理妊娠和胎兒異常時母血中FNRBC平均數(shù)量分別為(23.09±12.42)×103/L和(38.93±14.87)×103/L，病理妊娠組、胎兒異常組與正常妊娠組相比較，差異均有顯著意義(F=25.927，q=4.236、10.674，P&lt;0.01)。 &

14、lt;/p><p>　　2.2 各組孕婦不同孕期母血中FNRBC計數(shù)比較 </p><p>　　在正常妊娠組，隨著妊娠時間的延長，母血中FNRBC檢出數(shù)逐漸增多，但各期之間比較差異均無顯著性(P&gt;0.05)。病理妊娠組孕中期和孕早期相比FNRBC數(shù)量差異無顯著意義(F=17.325，q=2.112，P&gt;0.05)，但與孕晚期比較差異有顯著性(q=9.827，P&am

15、p;lt;0.05);而異常胎兒組孕中期和孕晚期FNRBC數(shù)量差異有極顯著意義(F=15.607，q=11.645，P&lt;0.01)。見表2。此外，正常妊娠組有3例母血中未發(fā)現(xiàn)FNRBC(分別為孕8、11、36周)，占4.41%。而正常未孕未育組有2例外周血中未發(fā)現(xiàn)FNRBC?！”? 各組不同孕期母血中FNRBC檢測結果及比較 </p><p>　　2.3 母體外周血中FNRBC數(shù)量與孕周的關系 &l

16、t;/p><p>　　正常妊娠組和病理妊娠組的母血中FNRBC數(shù)量與孕周呈正相關(r=0.491、 0.500,P&lt;0.05)。而異常胎兒組母血中FNRBC數(shù)量與孕周無顯著相關性(r=0.283，P&gt;0.05)。 </p><p>　　2.4 胎兒異常組胎盤絨毛細胞核型及胎血染色體異常與母體外周血中FNRBC數(shù)量的關系 </p><p>　　

17、子癇前期病人的胎盤絨毛切片中可見明顯的滋養(yǎng)細胞脫落現(xiàn)象，而此類病人母血中FNRBC數(shù)量則較正常妊娠時明顯升高。此外，光學顯微鏡下可見胎兒生長受限(FGR)病人胎盤絨毛滋養(yǎng)細胞數(shù)量減少，且細胞外基質沉積增多，說明其增殖活性明顯降低。正常核型胎兒母血中FNRBC的數(shù)量相對較少，大約每毫升有1～3個。在核型異常胎兒母血中FNRBC數(shù)量則明顯增多。胎兒異常時，母血中平均FNRBC的數(shù)量約為正常胎兒組的2～3倍，2例孕18/21三體胎兒病人達正

18、常妊娠的6～9倍。 </p><p><b>　　3 討 論 </b></p><p>　　3.1 母血中FNRBC的進入方式及數(shù)量 </p><p>　　正常成人外周血中不存在FNRBC,妊娠后由于母體與胎兒之間有母胎輸血，F(xiàn)NRBC有可能通過胎盤進入母體循環(huán)。胎盤在母體胎兒間作為機械屏障和免疫屏障起著重要作用。由于FNRBC需通過胎盤屏

19、障進入母體循環(huán)，所以它在母體循環(huán)中的數(shù)量與胎盤解剖結構和功能的完整性密切相關。此外，胎兒本身產(chǎn)生紅細胞的多寡，以及母體全身免疫和對胎兒的局部免疫狀態(tài)，都是影響母體循環(huán)中FNRBC數(shù)量的重要因素。胎盤解剖結構遭破壞，通透性增高，胎兒細胞濾過增多;胎兒由于低氧等因素造成紅細胞生成增加，母體血循環(huán)中FNRBC的數(shù)量也可能升高;胎兒細胞表面抗原與母體差異大，不能被母體耐受，導致母體對胎兒細胞的破壞和清除增加，母血中FNRBC的數(shù)量則可能減少。本

20、文結果也反映和驗證了這些理論。 </p><p>　　胎兒細胞在母體循環(huán)中出現(xiàn)的時間有個體差異，文獻報道母體外周血中檢出FNRBC的時間不一，但大多在7～12周[2]。從理論上講，胎兒細胞進入母血的最早時間是妊娠5周末，此時胎兒胎盤循環(huán)建立。此后大量絨毛生長，使母兒循環(huán)間的物質交換面積大大增加，進入母血的胎兒細胞數(shù)量明顯增加。在本研究中，我們最早在孕8周母血中發(fā)現(xiàn)FNRBC，較上述文獻報道的時間略微提前，可能與本

21、實驗僅用了單密度梯度離心法及瑞氏染色，操作步驟少，減少了細胞丟失，更多地保持了細胞形態(tài)的完整性有關。但我們在正常妊娠組仍有3例未發(fā)現(xiàn)FNRBC，占4.41%，分析可能與樣本個體差異以及實驗中的各種影響因素有關。 </p><p>　　3.2 母血中FNRBC數(shù)量與胎兒、胎盤生理性變化的關系 </p><p>　　有學者認為，母血中FNRBC數(shù)量在孕12～14周左右最多[3]，其后隨孕周增長

22、而逐漸減少。也有報道提出，母血中FNRBC數(shù)量與孕周無關[4]。本實驗中，我們對正常妊娠組、病理妊娠組和異常胎兒組孕婦孕早期、孕中期、孕晚期母體外周血進行檢測，結果顯示，正常妊娠組和病理妊娠組的母血中FNRBC數(shù)量與孕周呈正相關，母體循環(huán)中胎兒細胞的比例隨孕齡而增加。我們推測，雖然隨著胎兒發(fā)育成熟，胎兒血液中FNRBC在全血細胞中所占比例逐漸降低，但同時胎兒的血容量逐漸增加，與母體交換加快;而且隨著胎盤體積增大，使母兒間循環(huán)物質交換面積

23、大大增加;此外，胎盤血流量隨妊娠進展而逐漸增加，這些可能是母血中FNRBC數(shù)量隨孕周顯著增加的原因。異常胎兒組母血中FNRBC數(shù)量與孕周無明顯相關性，可能與胎兒、胎盤發(fā)育異常，或樣本數(shù)量較少有關。 </p><p>　　3.3 母血中FNRBC數(shù)量與胎兒、胎盤病理性變化的關系 </p><p>　　KADA等[5]研究顯示，在子癇前期時，母血中FNRBC數(shù)量較正常妊娠時增加。我們的實驗結果

24、與其一致。子癇前期病人妊娠生理免疫抑制反應減弱，胎盤絨毛滋養(yǎng)細胞有脫落現(xiàn)象，從而增加了胎盤屏障的通透性，使胎兒細胞進入母體增多。同時，子癇前期時，由于胎母間免疫平衡失調所導致的一系列胎盤絨毛和胎盤床血管的病理改變，導致胎兒宮內缺血低氧。因而， FNRBC也可以認為是一個慢性低氧的指標。低氧時，胎兒對氧和血紅蛋白的需要增加，促紅細胞生成素增加，產(chǎn)生并釋放不成熟紅細胞，胎兒血液循環(huán)中的FNRBC增多。所以，子癇前期時，胎兒由于宮內缺血低氧

25、產(chǎn)生FNRBC增多;胎盤通透性增高，F(xiàn)NRBC由胎盤漏出增加，導致母血中FNRBC數(shù)量上升。 </p><p>　　此外，本文的研究結果也顯示，在FGR時母血中FNRBC數(shù)量明顯增加，在孕中期平均(45.04±16.02)×103/L，遠遠高于同期各組水平。這可能與胎兒生長受限時，伴隨的慢性低氧和血紅蛋白增高，引起胎兒紅細胞生成和分化增強有關。另外，本文研究顯示，F(xiàn)GR時胎盤存在嚴重的滋養(yǎng)細胞

26、數(shù)量降低，細胞外基質沉積增多。這種異常胎盤也可在子癇前期時發(fā)現(xiàn)，可以導致母胎運輸增加和更多的FNRBC進入母血。 </p><p>　　本文結果還顯示，F(xiàn)NRBC在正常核型胎兒母血中數(shù)量相對較少，大約每毫升有1～3個。在核型異常胎兒母血中FNRBC數(shù)量則明顯增多。胎兒異常時，母血中平均FNRBC的數(shù)量約為正常胎兒組的2～3倍，2例孕18/21三體胎兒病人達正常妊娠的6～9倍。這可能與異常胎兒時，胎兒胎盤免疫損傷

27、重，導致胎母血液交換明顯增加有關。此外，也與畸形或三體胎兒本身可產(chǎn)生更多FNRBC且壽命更長有關。PCR定量分析結果表明，非整倍體胎兒母血中胎兒DNA含量明顯增加。也有報道顯示孕13三體胎兒的母血中FNRBC增加[6]，與我們的實驗結果一致。提示母血中FNRBC計數(shù)可以作為預測胎兒染色體異常的一個輔助指標。 </p><p>　　綜上所述，病理妊娠和胎兒異常時孕婦母血中FNRBC數(shù)量會發(fā)生明顯改變，母血中FNR

28、BC計數(shù)可輔助應用于胎兒異常的產(chǎn)前篩查。建議有條件的地方可在孕8周開始對孕婦外周血FNRBC進行檢測，如每毫升大于20個時應加強對病理妊娠和胎兒發(fā)育異常的相關檢查, 做到及早預防。 </p><p><b>　　【參考文獻】 </b></p><p>　　[1]周曉彬,紀新強,徐莉.醫(yī)用統(tǒng)計學軟件PPMS 1.5的組成和應用特點[J]. 齊魯醫(yī)學雜志, 2009,24

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