B亞群禽白血病病毒單克隆抗體的篩選及應(yīng)用.pdf

1、禽白血病對(duì)我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)產(chǎn)生了巨大危害，地方品系中A/B亞群禽白血病造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失，而A/B亞群不易區(qū)分，希望能制備出區(qū)分ALV-A與ALV-B的單抗，建立一種針對(duì)A/B亞群的檢測(cè)試劑盒，對(duì)A/B亞群的凈化和防制具有重大意義。
　　利用本實(shí)驗(yàn)室制備的針對(duì)ALV-B的陽性雜交瘤細(xì)胞，對(duì)其進(jìn)一步亞克隆篩選，共進(jìn)行了4次亞克隆實(shí)驗(yàn)，利用A/B亞群禽白血病病毒抗體檢測(cè)試劑盒，使用羊抗鼠的酶標(biāo)二抗進(jìn)行篩選。然后對(duì)所篩選的陽性雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)

2、生的單抗進(jìn)行IFA分析。對(duì)篩選的單抗進(jìn)行分型鑒定，采用雙抗體夾心法檢測(cè)亞型。同時(shí)對(duì)單抗的應(yīng)用進(jìn)行了探索，將產(chǎn)生的單抗與ALV-B進(jìn)行中和，在體外中和試驗(yàn)中，病毒與單抗中和后接種CEF細(xì)胞，用ELISA方法檢測(cè)P27。在體內(nèi)中和試驗(yàn)中，設(shè)置病毒抗體中和組以及攻毒組。單抗稀釋后與病毒中和，之后感染實(shí)驗(yàn)雞;攻毒組注射ALV-B的病毒液，3周后取攻毒組的雞飼喂幾種抗病毒藥物與單抗進(jìn)行比較。然后比較分析單抗中和病毒后，對(duì)雞各項(xiàng)指標(biāo)的影響，共研究了

3、ALV-B抗原的變化、ALV-B抗體的變化、雞的生長(zhǎng)性能變化、免疫器官變化、病理組織的變化、血液指標(biāo)的變化、以及ALV-B的PCR鑒定。
　　對(duì)陽性雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)顯示其能夠穩(wěn)定分泌單抗，抗體效價(jià)為24，亞克隆篩選共篩選了2株A9和G5，在對(duì)兩株單抗進(jìn)行IFA檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，G5對(duì)ALV-A、ALV-B有熒光反應(yīng);A9對(duì)ALV-A、ALV-B、ALV-J有熒光反應(yīng)。這兩株單抗都是IgM型。ALV-B與單抗中和后，P27檢測(cè)為陰性，顯示單

4、抗有中和作用。ALV-B與單抗中和后接種動(dòng)物，3周前并不能檢測(cè)出抗原陽性，但ALV-AB抗體陽性率很高達(dá)83％，在第四周可以檢測(cè)出P27，抗原陽性率最高達(dá)25％，攻毒組抗原陽性率最高達(dá)44％，表明病毒抗體中和后在體內(nèi)能產(chǎn)生較高的抗體陽性率，與攻毒組比較顯示抗原陽性率降低。抗體中和組雞群的生長(zhǎng)性能體重在第四周顯著高于對(duì)照組，攻毒組與對(duì)照組在第5周時(shí)差異顯著，攻毒組體重增重下降將明顯。免疫器官指數(shù)的變化中，攻毒組胸腺、脾臟、法氏囊在第3-7

5、周內(nèi)一直高于對(duì)照組和抗體中和組，略微腫大;抗體中和組與對(duì)照組免疫器官指數(shù)在第3-7周基本一致。對(duì)抗體中和組雞進(jìn)行解剖觀察，發(fā)現(xiàn)沒有明顯的病變，在攻毒組一只雞的組織切片出現(xiàn)淋巴巴細(xì)胞樣瘤細(xì)胞和髓樣瘤細(xì)胞形成的腫瘤灶，在肝臟中可發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞腫瘤灶，周圍肝細(xì)胞變性壞死。抗體中和組與對(duì)照組的血液各項(xiàng)指標(biāo)在檢測(cè)的3周內(nèi)變化相似，攻毒組的白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞數(shù)明顯低于抗體中和組與對(duì)照組;其它抗病毒藥物對(duì)攻毒組雞群血常規(guī)檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)明顯偏低。提取cDNA