B亞群禽白血病病毒單克隆抗體的篩選及應用.pdf

1、禽白血病對我國養(yǎng)禽業(yè)產(chǎn)生了巨大危害，地方品系中A/B亞群禽白血病造成了很大的經(jīng)濟損失，而A/B亞群不易區(qū)分，希望能制備出區(qū)分ALV-A與ALV-B的單抗，建立一種針對A/B亞群的檢測試劑盒，對A/B亞群的凈化和防制具有重大意義。
　　利用本實驗室制備的針對ALV-B的陽性雜交瘤細胞，對其進一步亞克隆篩選，共進行了4次亞克隆實驗，利用A/B亞群禽白血病病毒抗體檢測試劑盒，使用羊抗鼠的酶標二抗進行篩選。然后對所篩選的陽性雜交瘤細胞株產(chǎn)

2、生的單抗進行IFA分析。對篩選的單抗進行分型鑒定，采用雙抗體夾心法檢測亞型。同時對單抗的應用進行了探索，將產(chǎn)生的單抗與ALV-B進行中和，在體外中和試驗中，病毒與單抗中和后接種CEF細胞，用ELISA方法檢測P27。在體內(nèi)中和試驗中，設置病毒抗體中和組以及攻毒組。單抗稀釋后與病毒中和，之后感染實驗雞;攻毒組注射ALV-B的病毒液，3周后取攻毒組的雞飼喂幾種抗病毒藥物與單抗進行比較。然后比較分析單抗中和病毒后，對雞各項指標的影響，共研究了

3、ALV-B抗原的變化、ALV-B抗體的變化、雞的生長性能變化、免疫器官變化、病理組織的變化、血液指標的變化、以及ALV-B的PCR鑒定。
　　對陽性雜交瘤細胞培養(yǎng)顯示其能夠穩(wěn)定分泌單抗，抗體效價為24，亞克隆篩選共篩選了2株A9和G5，在對兩株單抗進行IFA檢測中發(fā)現(xiàn)，G5對ALV-A、ALV-B有熒光反應;A9對ALV-A、ALV-B、ALV-J有熒光反應。這兩株單抗都是IgM型。ALV-B與單抗中和后，P27檢測為陰性，顯示單

4、抗有中和作用。ALV-B與單抗中和后接種動物，3周前并不能檢測出抗原陽性，但ALV-AB抗體陽性率很高達83％，在第四周可以檢測出P27，抗原陽性率最高達25％，攻毒組抗原陽性率最高達44％，表明病毒抗體中和后在體內(nèi)能產(chǎn)生較高的抗體陽性率，與攻毒組比較顯示抗原陽性率降低?？贵w中和組雞群的生長性能體重在第四周顯著高于對照組，攻毒組與對照組在第5周時差異顯著，攻毒組體重增重下降將明顯。免疫器官指數(shù)的變化中，攻毒組胸腺、脾臟、法氏囊在第3-7

5、周內(nèi)一直高于對照組和抗體中和組，略微腫大;抗體中和組與對照組免疫器官指數(shù)在第3-7周基本一致。對抗體中和組雞進行解剖觀察，發(fā)現(xiàn)沒有明顯的病變，在攻毒組一只雞的組織切片出現(xiàn)淋巴巴細胞樣瘤細胞和髓樣瘤細胞形成的腫瘤灶，在肝臟中可發(fā)現(xiàn)淋巴細胞腫瘤灶，周圍肝細胞變性壞死?？贵w中和組與對照組的血液各項指標在檢測的3周內(nèi)變化相似，攻毒組的白細胞、淋巴細胞數(shù)明顯低于抗體中和組與對照組;其它抗病毒藥物對攻毒組雞群血常規(guī)檢測各項指標明顯偏低。提取cDNA