J亞群禽白血病病毒相關(guān)的雞急性纖維肉瘤人工造病試驗(yàn).pdf

1、禽白血病病毒(AvianLeukosisVirus，ALV)是以引起禽各種造血細(xì)胞腫瘤性增生為特征的一類反轉(zhuǎn)錄病毒群，其中能感染雞的可分為A、B、C、D、E和J6個(gè)亞型，臨床上常見的為A、B和J亞型，而C、D亞型在臨床上相對(duì)少見，E亞群主要以前病毒的形式存在于宿主基因組而廣泛存在。ALV-J是1988年英國(guó)Campton動(dòng)物保健協(xié)會(huì)首先分離得到的。近幾年在我國(guó)已先后從商品肉雞、蛋雞、麻雞中發(fā)現(xiàn)ALV-J，最近從臨床血管瘤病例中也分離到A

2、LV-J。早在100年前，就已發(fā)現(xiàn)了雞的急性肉瘤，后來證明是由與ALV-A或ALV-B相關(guān)的帶有腫瘤基因的急性ALV引起，其細(xì)胞類型是一種纖維細(xì)胞瘤，但一直沒有ALV-J相關(guān)的急性纖維肉瘤的報(bào)道。本研究從30多日齡817肉雜雞頸部疑似纖維肉瘤中分離到一株ALV-J，該ALV作為輔助病毒能在較短時(shí)間誘發(fā)急性纖維肉瘤，對(duì)其致病性進(jìn)行了研究。
　　 1、攻毒用病料來源與病毒制備
　　 由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院家禽腫瘤病研究室

3、于2010年從山東某雞場(chǎng)30多日齡頸部皮下出現(xiàn)肉瘤的817肉雜雞個(gè)體中采集到。本研究中，首先將在-80℃保存的肉瘤組織與無菌生理鹽水按1:5(質(zhì)量體積比)研磨成懸液，然后以12000r/min，離心10min后，再用0.22μm濾器過濾獲無細(xì)胞濾液。病料過濾液直接接種實(shí)驗(yàn)雞或接種于DF1細(xì)胞用于病毒分離或增殖。
　　 2、人工感染誘發(fā)的急性纖維肉瘤眼觀病變
　　 病毒引起的雞產(chǎn)生的急性纖維肉瘤主要附著在攻毒部位皮下，將完

4、整的大腫瘤切開后，可以看到許多大小不同且相互獨(dú)立的次級(jí)纖維肉瘤結(jié)節(jié)。
　　 3、病理組織學(xué)觀察
　　 病理組織學(xué)觀察，所有肉瘤都表現(xiàn)類似的病理組織學(xué)變化。在肉瘤組織不同的區(qū)域，表現(xiàn)不同的細(xì)胞類型，即使在同一切片中甚至同一視野的不同部位，也可能存在不同類型的細(xì)胞。有的區(qū)域細(xì)胞主要呈橢圓形或梭形或不規(guī)則形，但大部分區(qū)域是呈細(xì)長(zhǎng)的兩端尖狀的典型的纖維細(xì)胞。在腫瘤內(nèi)，纖維細(xì)胞呈束狀排列，細(xì)胞核形狀不一，有圓形、長(zhǎng)圓形、不規(guī)則形狀

5、，胞核大小不一。有的胞核似有分裂現(xiàn)象。
　　 4、不同注射部位接種病料濾過液
　　 采用頸部皮下、胸肌、腹腔為接種部位，分別于1日齡以0.2ml/只的劑量將病料濾過液接種經(jīng)棉拭子P27抗原檢測(cè)和血清抗體檢測(cè)呈陰性的817肉雜雞。結(jié)果顯示：頸部皮下、胸肌、腹腔三個(gè)部位攻毒雞的腫瘤發(fā)生率分別為100％(20/20)、95.2％(20/21)、100％(20/20)。
　　 5、不同品種雞接種病料濾過液
　　

6、試驗(yàn)選取棉拭子P27抗原檢測(cè)和血清抗體檢測(cè)呈陰性的1日齡白羽肉雞，海蘭褐，SPF雞，817肉雜雞4個(gè)品種雞，分別于1d以0.2ml/只的劑量采用腹腔接種新鮮腫瘤組織研磨。結(jié)果顯示：白羽肉雞、海蘭褐、817肉雜雞和SPF雞急性纖維肉瘤率分別為78.3％、63.2％、85.0％、90.0％。
　　 6、不同劑量病料濾過液接種
　　 實(shí)驗(yàn)以棉拭子P27抗原檢測(cè)和血清抗體檢測(cè)呈陰性的1日齡817肉雜雞和SPF雞為對(duì)象，首先將未經(jīng)

7、稀釋的病料濾過液及其1:10、1:100、1:1000、1:10000和1:100000的稀釋液以0.2ml/只的劑量頸部皮下接種817肉雜雞和SPF雞。結(jié)果顯示：病料過濾液病料濾過液直接接種817肉雜雞和SPF雞的腫瘤發(fā)生率均為100％(10/10)，10倍稀釋后攻毒雞的腫瘤發(fā)生率分別為80％(8/10)和100％(10/10)，100倍稀釋后攻毒雞的腫瘤發(fā)生率分別為100％(10/10)和80％(8/10)，1000倍稀后攻毒雞的腫