版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、近年來(lái)雞淋巴白血病(AL)一直危害著我國(guó)的養(yǎng)雞業(yè),已成為影響我國(guó)蛋雞業(yè)的第一大疫病。由于常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力,進(jìn)口ELISA試劑盒價(jià)格高昂且準(zhǔn)確率并不理想,所以急需一種快速、靈敏、準(zhǔn)確、高通量的檢測(cè)方法來(lái)預(yù)防和控制AL發(fā)生和傳播。本研究基于多重PCR技術(shù),建立禽白血病病毒(ALV)的B、E、J亞群的基因芯片分型和檢測(cè)方法。
根據(jù)NCBI已收錄的ALV三個(gè)亞群的參考毒株cDNA序列,在各亞群特異性基因突變區(qū),兩端選取其
2、保守區(qū)域,設(shè)計(jì)合成三個(gè)亞群的通用上游引物1條,以及B、E亞群的通用下游引物和J亞群下游引物各l條,將上述引物用Cy3標(biāo)記,建立多重PCR體系;參考目的序列內(nèi)部的三個(gè)亞群各自的保守區(qū)域,選擇亞群之間基因突變位點(diǎn)多的區(qū)域,設(shè)計(jì)5條寡核苷酸探針,合成過(guò)程中在每條探針的5'端先加入若干個(gè)堿基T,使探針長(zhǎng)度達(dá)到35mer左右,再進(jìn)行氨基化修飾,將合成好的探針點(diǎn)制在醛基化玻璃基片上,制作寡核苷酸探針基因檢測(cè)芯片;以寄主細(xì)胞DF-1中提取傳代ALV的
3、cDNA,以及合成NCBI收錄的各亞群參考毒株的cDNA序列作為檢測(cè)模板,利用Cy3標(biāo)記的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,與基因芯片進(jìn)行雜交反應(yīng),掃描結(jié)果。對(duì)基因芯片進(jìn)行特異性、靈敏度實(shí)驗(yàn),并對(duì)50份臨床樣品進(jìn)行檢測(cè)。
經(jīng)雜交反應(yīng)后,芯片能夠準(zhǔn)確檢測(cè)并分型三個(gè)亞群的參考毒株,其檢測(cè)靈敏度能夠達(dá)到102個(gè)基因拷貝,能夠同時(shí)檢測(cè)到三個(gè)亞群參考毒株的多重PCR產(chǎn)物,且與禽類(lèi)常見(jiàn)的四種病毒均無(wú)交叉反應(yīng)。對(duì)臨床樣品檢測(cè)的結(jié)果與ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- J亞群禽白血病病毒抗原-抗體檢測(cè)體系的建立.pdf
- A、B亞群禽白血病病毒LAMP檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用.pdf
- J亞群禽白血病病毒分離鑒定及間接ELISA方法建立和初步研究.pdf
- 地方品系蛋雞群中禽白血病病毒的鑒定和J亞群禽白血病病毒受體蛋白的分離.pdf
- 熒光定星PCR檢測(cè)禽白血病病毒與RNA干擾抑制J亞群禽白血病病毒復(fù)制的研究.pdf
- 禽白血病病毒J亞群、B亞群的分離鑒定及核酸探針的制備.pdf
- SYBRGreenⅠ熒光定量RT-PCR檢測(cè)J亞群禽白血病病毒方法的建立及應(yīng)用.pdf
- J亞群禽白血病病毒分離株變異分析及重組抗原ELISA檢測(cè)方法的建立.pdf
- 蛋雞J亞群禽白血病病毒的分離和部分序列測(cè)定.pdf
- J亞群禽白血病病毒受體的分離鑒定及研究.pdf
- 禽白血病病毒J亞群免疫抑制機(jī)理的研究.pdf
- J亞群禽白血病病毒嵌合多表位基因釀酒酵母表面展示.pdf
- B亞群禽白血病病毒單克隆抗體的制備.pdf
- miRNA骨架內(nèi)置siRNA干擾J亞群禽白血病病毒復(fù)制.pdf
- J亞群禽白血病病毒gp85基因的克隆表達(dá)及初步應(yīng)用.pdf
- B亞群禽白血病病毒分離株的生物學(xué)特性.pdf
- 致急性纖維肉瘤的缺陷型J亞群禽白血病病毒腫瘤基因的鑒定.pdf
- J亞群禽白血病病毒與馬立克氏病病毒協(xié)同致病研究.pdf
- J亞型禽白血病病毒抗體檢測(cè)方法的建立及LTR體外啟動(dòng)活性分析.pdf
- J亞群禽白血病病毒和禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒單克隆抗體的研制.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論