蛋雞J亞群禽白血病病毒的分離和部分序列測定.pdf

1、J亞群禽白血病(Avianleucosis virus subgroup J,ALV-J)是一種病毒引起的禽類腫瘤性疾病,又稱作骨髓細胞瘤病(Myelocytomatosis).J亞群禽白血病自發(fā)現(xiàn)以來,僅見于肉雞發(fā)病的報道,該病給世界上許多國家的養(yǎng)雞業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失.2002年中國農業(yè)大學徐鑌蕊發(fā)現(xiàn)了蛋雞J亞群禽白血病.自然發(fā)病的蛋雞表現(xiàn)為貧血、消瘦、產蛋下降、死亡率達10﹪,尸體剖檢可見卵巢、輸卵管發(fā)育不良,給蛋雞業(yè)造成很大的

2、經(jīng)濟損失,經(jīng)過病理學、免疫組化學以及PCR方法檢測ALV-Jgp85抗原,并對該病毒亞群特異性的序列進行測定,在國內外首次發(fā)現(xiàn)并報道了蛋雞J亞群禽白血病的自然病例.該研究采用臨床發(fā)病蛋雞的病料進行了病毒分離.病料(肝、脾、腎)過濾除菌后接種于雞胚成纖維細胞(CEF).培養(yǎng)7天后,用ALV-Jgp85特異性單抗進行間接熒光抗體法(IFA)檢測接種的CEF,結果發(fā)現(xiàn)CEF的胞漿內有明顯的特異性熒光,細胞核未被染色,用免疫組化的方法檢測到AL

3、V-J囊膜特異性蛋白gp85的存在,為了進一步對病毒核酸序列進行分析,我們提取接種病料的CEF的總RNA,做反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR),在pol基因的3'端和gp85編碼基因的內部設計了一對引物,擴增得到長度為545bp的ALV-J特異性片段,與預期片段大小相符,經(jīng)TaKaRa公司序列測定后,與ALV-J原型株HPRS-103的序列進行了比較,發(fā)現(xiàn)其核苷酸同源性為97.4﹪,所編碼氨基酸的同源性為96.1﹪.該研究結果顯示我們