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文檔簡介
1、根據(jù)己報道的甘蔗ACO基因的序列,在讀碼框外設(shè)計特異引物,通過RT-PCR技術(shù),克隆了甘蔗ACO基因編碼區(qū)969bp的cDNA片段,分別正向和反向插入植物表達載體pBI121的CaMV35S啟動子和NOS終止子之間,構(gòu)建了ACO基因的正義植物表達載體pBIaco和反義植物表達載體pBIantiaco,該載體的抗性選擇標記為NPT Ⅱ基因。 利用凍融法分別將正義植物表達載體pBIaco和反義植物表達載體pBIantiaco導(dǎo)入根癌
2、農(nóng)桿菌菌株EHAl05中,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,將ACO正、反義基因?qū)霟煵軰346。經(jīng)PCR篩選,獲得34株正義和28株反義轉(zhuǎn)基因植株,轉(zhuǎn)化率分別為24%和31%。取部分PCR陽性植株進行Dot-Southem雜交檢測,證明外源基因已整合入煙草的基因組中。采用氣相色譜法對轉(zhuǎn)基因煙草進行內(nèi)源乙烯釋放量測定,結(jié)果顯示,正義轉(zhuǎn)基因煙草的乙烯釋放比對照平均增加77.22%,而反義轉(zhuǎn)基因煙草的乙烯釋放量僅為對照的31.67%,達到極顯著差異。說明甘
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