農(nóng)桿菌介導(dǎo)的百合ACC氧化酶反義基因遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、百合是世界著名的五大切花之一，其花朵碩大，色彩各異，姿態(tài)優(yōu)雅，芳香濃郁，倍受人們喜愛。全世界切花百合的每年銷量數(shù)以億計。但是，百合與其它鮮切花一樣隨著花朵的開放迅速衰老，如何延長百合花朵的壽命已成為生產(chǎn)與消費上急需解決的實際問題，也是近年來科學(xué)研究的主要課題之一。已有的研究結(jié)果表明，百合為乙烯釋放型花卉，百合花朵開放時，伴隨著乙烯的釋放和衰老。因此，將ACC氧化酶反義基因?qū)氚俸象w細胞中，通過調(diào)控百合乙烯表達來控制百合的衰老，以達到延長

2、百合花期的目的。 本研究是在構(gòu)建好的百合ACC氧化酶反義基因基礎(chǔ)上，以東方百合‘索邦’為試材，建立百合遺傳轉(zhuǎn)化愈傷組織受體系統(tǒng)和直接分化受體系統(tǒng)，并采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進行ACC氧化酶反義基因轉(zhuǎn)化研究，以獲得轉(zhuǎn)化的百合ACC氧化酶反義基因植株，為百合遺傳轉(zhuǎn)化提供依據(jù)。主要的研究結(jié)果如下： 1.建立了東方百合‘索邦’愈傷組織受體系統(tǒng) 以東方百合‘索邦’田間取材的鱗片、再生形成的小鱗片及葉片為外植體，建立了愈傷組織受體系

3、統(tǒng)，3種外植體誘導(dǎo)愈傷組織的最適培養(yǎng)基為MS+NAA0.5mg/L+6-BA0.4mg/L+蔗糖90g/L+VB14.0mg/L；愈傷組織不定芽分化的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L；愈傷組織潮霉素抗性質(zhì)量濃度為20mg/L。 2.建立了東方百合‘索邦’直接分化受體系統(tǒng) 以東方百合‘索邦’再生形成的小鱗片和葉片為外植體，誘導(dǎo)分化不定芽的最適培養(yǎng)基分別為MS+NAA1.5mg/L，MS+NAA0.5mg/L；小鱗片

4、和葉片潮霉素抗性質(zhì)量濃度為15mg/L。 3.建立了根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的百合遺傳轉(zhuǎn)化體系 分別以愈傷組織受體系統(tǒng)和直接分化受體系統(tǒng)作為遺傳轉(zhuǎn)化的受體系統(tǒng)進行試驗，獲得百合程序化的遺傳轉(zhuǎn)化體系。 4.獲得了百合ACC氧化酶反義基因轉(zhuǎn)化植株 對轉(zhuǎn)化的潮霉素抗性芽進行PCR檢測，以愈傷組織為受體系統(tǒng)的轉(zhuǎn)化中，農(nóng)桿菌EHA105介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化的70株抗性芽獲得了5株陽性植株，轉(zhuǎn)化率為7.14％，農(nóng)桿菌GV3101介導(dǎo)遺

5、傳轉(zhuǎn)化的23株抗性芽中未獲得陽性植株；小鱗片受體系統(tǒng)轉(zhuǎn)化的180株抗性芽獲得了2株陽性植株，轉(zhuǎn)化率為1.11％；葉柄受體系統(tǒng)轉(zhuǎn)化的33株抗性芽中未獲得陽性植株。因此，愈傷組織間接受體系統(tǒng)介導(dǎo)的百合遺傳轉(zhuǎn)化優(yōu)于直接分化受體系統(tǒng)，農(nóng)桿菌EHA105比農(nóng)桿菌GV3101適合介導(dǎo)百合遺傳轉(zhuǎn)化。 5.建立了東方百合‘索邦’組培快繁技術(shù) 以東方百合‘索邦’再生形成的小鱗片為外植體，誘導(dǎo)試管內(nèi)直接形成小鱗莖的最適培養(yǎng)基為MS+NAA2