交沙霉素生產(chǎn)菌株的菌種選育研究.pdf

1、通過(guò)對(duì)本實(shí)驗(yàn)室保藏的交沙霉素產(chǎn)生菌那波鏈霉菌交沙霉素變種(Streptomycesnarbonensisvar.Josamyceticus)JM6、JM8、JM14、JM30和JM310菌株進(jìn)行活化、搖瓶發(fā)酵和傳代穩(wěn)定性試驗(yàn)，確定遺傳性能較為穩(wěn)定的JM8(9.3μg/mL)為誘變育種的出發(fā)菌株。 對(duì)JM8菌株進(jìn)行氯化鋰-紫外線誘變育種，結(jié)合鏈霉素抗性平板篩選，獲得比出發(fā)菌株JM8效價(jià)分別提高9.32倍和6.34倍的菌株UV90(

2、96.0μg/mL)和UV50(68.3μg/mL)，對(duì)UV90進(jìn)行60Co-γ射線輻射誘變，所得誘變菌株效價(jià)不高且易發(fā)生回復(fù)突變，未能篩選到高產(chǎn)菌株。對(duì)氯化鋰-紫外線誘變獲得的另一高產(chǎn)菌株UV50(68.3μg/mL)進(jìn)行分離復(fù)壯，獲得一株效價(jià)較高、遺傳性能較為穩(wěn)定的菌株UV50-20(70.7μg/mL)。以UV50-20為出發(fā)菌株，探索菌齡和溶菌酶濃度、酶解時(shí)間及酶解溫度對(duì)原生質(zhì)體形成和再生的影響，確定制備原生質(zhì)體的適宜條件為：選

3、用種子液中培養(yǎng)34小時(shí)的菌絲體，在4mg/mL的溶菌酶濃度下，于32℃水浴中酶解90min。對(duì)菌株UV50-20進(jìn)行了原生質(zhì)體再生篩選，獲得了遺傳性能較為穩(wěn)定的菌株Y19(0μg/mL)和效價(jià)比UV50-20提高1.22倍的菌株Y13(157.3μg/mL)；對(duì)Y13進(jìn)行原生質(zhì)體-紫外線誘變，得到比Y13效價(jià)提高15.89％的菌株YU15(182.3μg/mL)。通過(guò)紫外滅活YU15原生質(zhì)體，并與Y19原生質(zhì)體融合篩選得到一株比親本菌株

4、效價(jià)提高17.72％的融合子R29菌株(214.6μg/mL)。傳代試驗(yàn)表明菌株JM8、UV50、UV50-20、Y19、Y13、YU15和R29傳代均比較穩(wěn)定。 利用SAS軟件以菌株R29為試驗(yàn)菌株進(jìn)行了發(fā)酵培養(yǎng)基配方的優(yōu)化研究。首先，采用Plackett-Burman設(shè)計(jì)法法篩選出影響R29發(fā)酵合成交沙霉素的主要因素為棉籽餅粉和豆油，繼而利用最陡爬坡路徑試驗(yàn)找到試驗(yàn)中心點(diǎn)，綜合中心組合設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析法確定主要因素的最佳濃度