阿維拉霉素菌種推理選育與aviD基因的強化表達研究.pdf

1、阿維拉霉素是發(fā)酵法來源的一種新型獸用消化促進劑和代謝調(diào)節(jié)劑,由綠色產(chǎn)色鏈霉菌(Streptomyces viridochromogenes)發(fā)酵產(chǎn)生,被廣泛應用于畜禽飼料中,效果顯著,安全性極高,具有較好的應用前景。目前,菌種產(chǎn)素能力低、產(chǎn)品價格昂貴是限制阿維拉霉素在國內(nèi)普遍應用的主要因素,因此本文通過傳統(tǒng)誘變方法和代謝工程手段兩種方式對阿維拉霉素生產(chǎn)菌進行高產(chǎn)菌株選育與遺傳改造。
　　 為了提高阿維拉霉素生產(chǎn)菌的產(chǎn)量,本文以實

2、驗室保藏的綠色產(chǎn)色鏈霉菌(Streptomyces viridochromogenes NRRL2860)為出發(fā)菌株,采用紫外-氯化鋰、微波-吖啶橙多輪復合誘變,結(jié)合氯化鈣、阿維拉霉素、鏈霉素多重抗性篩選,獲得一株遺傳穩(wěn)定的高產(chǎn)菌株MY-20。搖瓶發(fā)酵結(jié)果顯示,與原始出發(fā)菌相比,菌株MY-20表現(xiàn)出高產(chǎn)菌株的生長代謝特性,168小時阿維拉霉素A和B組分產(chǎn)量達到1.0g/L和3.08 g/L,分別比出發(fā)菌提高了488%和584%。

3、　　 同時,本課題嘗試采用代謝工程手段提高阿維拉霉素產(chǎn)量,建立了綠色產(chǎn)色鏈霉菌種屬間接合轉(zhuǎn)移方法,Streptomyces viridochromogenes-大腸桿菌以pSET152做為接合轉(zhuǎn)移載體,MS做為接合轉(zhuǎn)移最優(yōu)培養(yǎng)基,以供體菌E.coliET12567(pUZ8002)和受體菌Streptomyces viridochromogenes1:1的比例是Streptomyces viridochromogenes接合轉(zhuǎn)移體系的