鏈霉素生產(chǎn)菌株的選育及發(fā)酵條件的研究.pdf

1、乙酰異戊酰泰樂菌素(Acetylisovaleryltylosin,縮寫為AIV)是一種十分重要的泰樂菌素(Tylosin)衍生物,它是由耐熱鏈霉菌ATCC11416通過生物轉(zhuǎn)化Tylosin,在Tylosin的3'-羥基位置乙?；?"-羥基位置異戊?；玫降?進(jìn)行催化的兩個(gè)酶分別為乙酰基轉(zhuǎn)移酶和異戊?；D(zhuǎn)移酶。本實(shí)驗(yàn)從耐熱鏈霉菌ATCC11416出發(fā),通過誘變選育Carbomycin高產(chǎn)菌株,從而為高效的將Tylosin轉(zhuǎn)化為

2、AIV做好準(zhǔn)備。
　　 為初步確定耐熱鏈霉菌的發(fā)酵條件,通過生長曲線的測(cè)定,發(fā)現(xiàn)耐熱鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)Carbomycin的發(fā)酵時(shí)間達(dá)到5天時(shí)其效價(jià)和菌體干重達(dá)到最大,第6天時(shí)效價(jià)和菌體量急劇下降,推測(cè)抗生素降解是由菌體自溶釋放物和pH值的降低的雙重因素造成的。本實(shí)驗(yàn)采用紫外誘變和微波誘變相結(jié)合的方法對(duì)耐熱鏈霉菌Carbomycin高產(chǎn)菌株進(jìn)行選育。經(jīng)兩次紫外誘變后,其耐熱鏈霉菌的發(fā)酵效價(jià)由最初的12.34μg／ml提高到97.96

3、μg／ml,增加了近7倍,對(duì)Tylosin耐受性也由6μg／ml增加到50μg／ml；再經(jīng)一次微波誘變后,耐熱鏈霉菌對(duì)Tylosin的耐受性也從50μg／ml提高到誘變后的80μg／ml,但其效價(jià)卻有一定的下降。通過發(fā)酵條件的優(yōu)化,確定發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳碳源和氮源分別為淀粉和蛋白胨,通過響應(yīng)面分析確定其最優(yōu)濃度分別為63.5g／L和35.5g／L,比原最適濃度的發(fā)酵效價(jià)提高了5％。CaCO3的加入對(duì)Carbomycin的產(chǎn)量并無明顯影響,

4、但在添加異戊酰前體物L(fēng)eu后,其發(fā)酵效價(jià)可達(dá)174.03μg／ml,比未添加Leu的發(fā)酵效價(jià)提高了19％。經(jīng)發(fā)酵條件優(yōu)化后,Carbomycin的發(fā)酵效價(jià)比未優(yōu)化前提高了近1倍。
　　 向發(fā)酵液中添加Tylosin并進(jìn)行萃取后,利用HPLC-MS測(cè)定了發(fā)酵液中Tylosin轉(zhuǎn)化為AIV的轉(zhuǎn)化率,同時(shí)研究了不同添加量對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響。當(dāng)添加濃度低于150μg／ml時(shí),轉(zhuǎn)化率穩(wěn)中有升,由74％升到75％。當(dāng)添加濃度為200μg／ml時(shí)