鼠傷寒沙門菌比色檢測的適配體生物傳感器研究.pdf

1、目的：
　　 通過對鼠傷寒沙門菌脂多糖特異性適配體的截短設(shè)計，初步研究適配體的序列、結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系；并將截短后的鼠傷寒沙門菌脂多糖特異性適配體修飾于聚丁二炔納米囊泡表面，從而構(gòu)建一種可以快速比色檢測鼠傷寒沙門菌的適配體生物傳感器。
　　 方法：
　　 1．聚丁二炔納米囊泡的制備與表征：以PCDA單體、DMPC和鼠傷寒沙門菌脂多糖(LPS)為膜材，采用探頭超聲法制備三種不同體系的聚丁二炔納米囊泡，分別是純PD

2、A囊泡、PDA/DMPC混合磷脂囊泡以及PDA/DMPC/LPS混合磷脂囊泡。采用透射電鏡負(fù)染技術(shù)，對這三種囊泡進(jìn)行形貌表征；采用紫外-可見光吸收光譜技術(shù)，對這三種囊泡進(jìn)行特征吸收峰表征；采用鱟試驗，對LPS是否插入囊泡及插入方向進(jìn)行驗證。
　　 3．適配體-聚丁二炔納米生物傳感器的鼠傷寒沙門菌比色檢測及于實際標(biāo)本中比色檢測鼠傷寒沙門菌：利用適配體與鼠傷寒沙門菌間特異性結(jié)合和結(jié)合后所引起的聚丁二炔納米囊泡顏色變化和比色響應(yīng)值(C

3、R％)改變來定性或定量檢測溶液中的鼠傷寒沙門菌。并通過激光共聚焦顯微鏡對適配體修飾的聚丁二炔納米囊泡與鼠傷寒沙門菌之間的作用進(jìn)行驗證。利用適配體與鼠傷寒沙門菌間特異性結(jié)合和結(jié)合后所引起的聚丁二炔納米囊泡顏色變化和比色響應(yīng)值(CR％)改變來定性或定量檢測實際標(biāo)本中的鼠傷寒沙門菌。
　　 結(jié)果：
　　 1．聚丁二炔納米囊泡的制備與表征：經(jīng)透射電鏡表征證實，純PDA體系、PDA/DMPC混合磷脂體系以及PDA/DMPC/LPS

4、混合磷脂體系均能形成囊泡，直徑100nm左右以下；經(jīng)254nm紫外線照射，各種體系均從無色轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色；經(jīng)鱟試驗證實，PDA/DMPC/LPS混合磷脂囊泡說明絕大部分LPS成功插入囊泡且LPS的特異多糖部分分布在囊泡表面。
　　 2．鼠傷寒沙門菌脂多糖特異性適配體的截短設(shè)計與結(jié)合實驗：經(jīng)紫外-可見光吸收光譜分析證實，成功將適配體修飾到聚丁二炔納米囊泡表面，其修飾效率大于80％;經(jīng)ELISA方法和透射電鏡負(fù)染技術(shù)，以及PDA/DMP

5、C/LPS混合磷脂引起的適配體-聚丁二炔納米生物傳感器明顯顏色變化和CR％增大等多項證實，成功獲得具有結(jié)合鼠傷寒沙門菌功能的適配體截短序列。
　　 3．適配體-聚丁二炔納米生物傳感器的鼠傷寒沙門菌比色檢測于實際標(biāo)本中比色檢測鼠傷寒沙門菌：成功構(gòu)建一種可以快速比色檢測鼠傷寒沙門菌的適配體生物傳感器，并經(jīng)激光共聚焦顯微鏡證實。其不需要特殊儀囂，操作簡便，檢測時間短，僅需3h;靈敏度較高檢出限為105CFU/mL，線性范圍為105～1

6、08CFU/mL;穩(wěn)定性高，對107CFU/mL菌液檢測的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(relativestandarddeviation，RSD)為5％；特異性強，不與傷寒沙門菌、甲型副傷寒沙門菌、乙型副傷寒沙門菌、大腸桿菌、宋內(nèi)志賀菌、福氏志賀菌等反應(yīng)。適配體-聚丁二炔納米生物傳感器：構(gòu)建的快速比色檢測鼠傷寒沙門菌的適配體生物傳感器在檢測糞便模擬陽性標(biāo)本方面，雖然檢測效率不如實驗室模擬標(biāo)本的程度，但趨勢一致。本實驗中還將制備的適配體生物傳感器應(yīng)用于