基于核酸適配體的生物傳感器的研究.pdf

1、蛋白質(zhì)是生物體內(nèi)含量最高，功能最重要的生物大分子。常規(guī)的蛋白質(zhì)檢測方法一般是基于傳統(tǒng)的抗原-抗體之間的免疫反應(yīng)進(jìn)行的，由于抗原和抗體之間的特異性反應(yīng)，免疫傳感器具有很好的專一性和選擇性。然而，近年來以適配體作為識(shí)別元件的蛋白質(zhì)檢測技術(shù)越來越受到人們的關(guān)注。適配體(aptamer)一詞來源于拉丁語aptus，即to fit，適合的意思。核酸適配體是一類通過SELEX 技術(shù)體外篩選而獲得的，對蛋白質(zhì)有很好的識(shí)別能力，核酸適配體對蛋白質(zhì)的親和

2、力和特異性可與蛋白質(zhì)的抗體相媲美,解離常數(shù)通常在納摩爾到皮摩爾之間，且與抗體相比具有許多優(yōu)越性.如核酸適配體是體外人工化學(xué)合成,合成簡單,穩(wěn)定性、重現(xiàn)性好,容易修飾，可以按需要對序列中的核苷酸定點(diǎn)標(biāo)記各種官能團(tuán)和報(bào)告基團(tuán),如熒光基團(tuán)，各種酶，電活性物質(zhì)等。便于核酸適配體的固定化和信號(hào)的檢測，檢測目標(biāo)廣泛等。本文基于核酸適配體的上述優(yōu)點(diǎn)，在傳統(tǒng)的免疫傳感器的基礎(chǔ)上，構(gòu)建了一系列適配體生物傳感器。具體內(nèi)容如下：
　　 (1)在第二章

3、中報(bào)道了一種無標(biāo)記電化學(xué)方法來檢測凝血酶。在這個(gè)工作中，我們引進(jìn)了一種新的夾心電化學(xué)方法，采用抗體作為捕獲探針，適配體作為檢測探針，亞甲基蘭作為電活性物質(zhì)嵌入適配體中來獲取電信號(hào)，不需要對探針進(jìn)行任何修飾，傳感器對凝血酶的線性響應(yīng)范圍是1-60nM，檢測下限是0.5nM。
　　 (2)在第二部分的夾心模式的基礎(chǔ)上，在第三章中，報(bào)道了一種基于適配體的酶放大方法來檢測免疫球蛋白 E (IgE)。生物素化抗IgE 適配體作為檢測探針，

4、親和素標(biāo)記的堿性磷酸酯酶與電極表面的適配體上的生物素相連，堿性磷酸酯酶催化抗壞血酸磷酸酯水解成強(qiáng)還原劑抗壞血酸，將溶液中的銀離子還原成銀單質(zhì)，沉積到電極表面。沉積的銀的量與電極表面固定的IgE 成正比，用溶出伏安法來定量。
　　 (3)在第四章中報(bào)道了一種基于目標(biāo)物誘導(dǎo)適配體置換技術(shù)的無標(biāo)記電化學(xué)檢測方法，用來檢測腺苷。利用適配體與目標(biāo)物的強(qiáng)親和力，將電極表面與捕獲探針雜交的互補(bǔ)鏈置換下來，使嵌入在雙鏈中的電活性物質(zhì)亞甲基蘭量減