傷寒沙門(mén)菌納米生物傳感器的研究.pdf

1、目的：
　　 通過(guò)物理方法將油脂熒光染料(4，4-Difluoro-5-(2-thienyl)-4-bora-3a，4a，-dia-z-as-indacene-3-dodecanoicacid，BODIPY558/568C12，以下簡(jiǎn)稱(chēng)BO558）摻入聚丁二炔(polydiacetylene，PDA)囊泡中，構(gòu)建一種PDA/BO558熒光混合囊泡，并對(duì)熒光混合囊泡的基本特性、熒光強(qiáng)度變化原理及機(jī)制進(jìn)行初步探究；將傷寒沙門(mén)菌纖毛特

2、異性寡肽修飾于PDA/BO558熒光混合囊泡表面，構(gòu)建能夠識(shí)別傷寒沙門(mén)菌的寡肽納米生物傳感器，通過(guò)檢測(cè)寡肽納米生物傳感器與傷寒沙門(mén)菌反應(yīng)而引起的熒光光譜強(qiáng)度的變化，從而建立一種可以快速檢測(cè)傷寒沙門(mén)菌的納米生物傳感器。
　　 方法：
　　 1．不同體系聚丁二炔囊泡的制備與表征：以PCDA單體、BO558為膜材，采用探頭超聲法制備兩種不同體系的聚丁二炔囊泡，分別是純PDA囊泡、PDA/BO558混合熒光囊泡。并采用透射電鏡負(fù)

3、染技術(shù)，對(duì)這兩種囊泡進(jìn)行形貌表征；采用紫外可見(jiàn)光吸收光譜技術(shù)、熒光光譜技術(shù)，對(duì)這兩種囊泡進(jìn)行特征吸收峰的表征。檢測(cè)PDA/BO558囊泡隨環(huán)境中酸堿度和溫度變化而產(chǎn)生的熒光光譜的變化及比色響應(yīng)值的改變，并初步了解PDA/BO558納米囊泡熒光強(qiáng)度改變的特性。
　　 2．PDA/BO558混合熒光囊泡的傷寒沙門(mén)菌纖毛特異性寡肽修飾：將傷寒沙門(mén)菌纖毛特異性寡肽通過(guò)酰胺化反應(yīng)修飾到PDA/BO558混合熒光囊泡的表面，并通過(guò)可見(jiàn)光吸收

4、光譜、熒光光譜檢測(cè)，計(jì)算寡肽的修飾效率，實(shí)現(xiàn)生物傳感器的組裝以及對(duì)傷寒沙門(mén)菌的特異識(shí)別。
　　 3．寡肽-納米生物傳感器的熒光光譜檢測(cè)：由于寡肽納米生物傳感器上的寡肽與傷寒沙門(mén)菌間能夠發(fā)生特異性識(shí)別并結(jié)合，利用此結(jié)合影響寡肽納米生物傳感器中聚丁二炔骨架構(gòu)型而引起的熒光共振能量轉(zhuǎn)移程度的改變，通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)前后寡肽納米生物傳感器熒光光譜575nm處熒光強(qiáng)度的變化來(lái)定性或定量檢測(cè)溶液中的傷寒沙門(mén)菌。并通過(guò)透射電子顯微鏡和激光共聚焦顯微

5、鏡對(duì)寡肽納米生物傳感器與傷寒沙門(mén)菌之間的作用進(jìn)行驗(yàn)證。
　　 結(jié)果：
　　 1．聚丁二炔囊泡的制備與表征：經(jīng)透射電鏡表征證實(shí)，純PDA、PDA/BO558混合體系均能形成囊泡，直徑40-100nm左右；經(jīng)254nm紫外光照射后，純PDA體系從無(wú)色變成藍(lán)色，PDA/BO558混合體系從粉色轉(zhuǎn)變成藍(lán)色。PDA/BO558囊泡的熒光強(qiáng)度隨環(huán)境中溫度的增加而升高，隨溶液中pH值的增加其熒光強(qiáng)度也有明顯的增加。在PDA/BO558

6、囊泡熒光強(qiáng)度的改變過(guò)程中，囊泡聚丁二炔共軛骨架的構(gòu)型也發(fā)生了變化，說(shuō)明熒光強(qiáng)度的改變與囊泡骨架構(gòu)型的改變具有密切的關(guān)系。
　　 2．傷寒沙門(mén)菌特異性識(shí)別寡肽修飾PDA/BO558熒光囊泡：經(jīng)可見(jiàn)光吸收光譜、熒光光譜分析證實(shí)，成功將傷寒沙門(mén)菌纖毛特異性寡肽修飾到PDA/BO558熒光囊泡表面，經(jīng)過(guò)可見(jiàn)光吸收光譜、熒光光譜的檢測(cè)，計(jì)算其修飾率，修飾效率大約為80％。
　　 3．寡肽納米生物傳感器的傷寒沙門(mén)菌檢測(cè)：成功構(gòu)建一種

7、可以快速檢測(cè)傷寒沙門(mén)菌的納米生物傳感器，并經(jīng)透射電鏡和激光共聚焦顯微鏡證實(shí)。其不需要特殊儀囂，操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)時(shí)間短，僅需100min;靈敏度較高，檢出限為105CFU/mL;線(xiàn)性范圍為105～108CFU/mL;特異性強(qiáng)，對(duì)傷寒沙門(mén)菌的檢測(cè)特異性為100％，不與鼠傷寒沙門(mén)菌、腸致病性大腸桿菌O111、腸出血性大腸桿菌O157:H7、乙型副傷寒沙門(mén)菌、福氏志賀菌、宋內(nèi)志賀菌、單核細(xì)胞增生性李斯特菌等反應(yīng)。
　　 結(jié)論：