AtNHX 1基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建及農(nóng)桿菌介導(dǎo)的苜蓿的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、高鹽是限制作物生長(zhǎng)、發(fā)育和產(chǎn)量的最嚴(yán)重的非生物脅迫之一。由于土壤鹽漬化的日趨嚴(yán)重，提高作物的耐鹽性已成為一個(gè)日益緊迫的研究課題。然而，由于耐鹽反應(yīng)是一個(gè)極為復(fù)雜的過(guò)程，過(guò)去通過(guò)傳統(tǒng)的育種和遺傳工程取得的成功非常有限。隨著分子生物學(xué)及生物技術(shù)的迅速發(fā)展，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一些與耐鹽相關(guān)的新基因，并對(duì)這些基因的表達(dá)方式及其在耐鹽反應(yīng)中的作用已逐步了解，這為轉(zhuǎn)基因工程提供了新的材料。目前，通過(guò)控制耐鹽相關(guān)基因在植物體內(nèi)的表達(dá)，已獲得了一些提高耐鹽性的

2、轉(zhuǎn)基因植物。國(guó)內(nèi)已有應(yīng)用擬南芥液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因(AtNHXⅠ)轉(zhuǎn)化玉米和小麥等農(nóng)作物，并獲得了耐鹽能力相對(duì)提高的轉(zhuǎn)基因植株的文獻(xiàn)報(bào)道，這表明應(yīng)用AtNHXⅠ基因培育耐鹽作物品系具有廣闊的前景。 紫花苜蓿(MedicagosativaL)作為一種價(jià)值最高的優(yōu)質(zhì)豆科牧草，在我國(guó)西北和華北地區(qū)的種植面積很廣泛。由于在畜牧業(yè)中占有極其重要的地位，利用基因工程技術(shù)來(lái)提高苜蓿耐鹽性，期望獲得優(yōu)良抗逆新品系，這對(duì)我國(guó)牧草業(yè)的

3、發(fā)展有重要的現(xiàn)實(shí)意義。 本研究將克隆所得的擬南芥液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，添加了植物表達(dá)CaM35S啟動(dòng)子和NospolyA終止子，插入到中間表達(dá)載體pCAMBIAl300相應(yīng)的多克隆位點(diǎn)中，經(jīng)過(guò)酶切及PCR鑒定，獲得了重組質(zhì)粒，并通過(guò)凍融法將其轉(zhuǎn)化到根癌農(nóng)桿菌LBA4404中，成功地構(gòu)建了AtNHXⅠ基因的植物表達(dá)載體。采用苜蓿品種農(nóng)寶的器官發(fā)生及胚狀體發(fā)生兩種再生體系進(jìn)行農(nóng)桿菌介導(dǎo)的AtNHXⅠ基因的轉(zhuǎn)化，并對(duì)其轉(zhuǎn)