農桿菌介導的AtPCS1基因轉化紫花苜蓿的研究.pdf

1、利用植物修復重金屬污染的土壤是一種廉價可行的修復技術。大部分已發(fā)現(xiàn)的重金屬超富集植物生物量小，限制了其在植物修復方面的應用。本實驗借助基因工程的手段將重金屬富集耐受相關的基因AtPCS1轉入生物量大適應性廣的苜蓿中，以期獲得能富集重金屬的苜蓿，為今后的工作提供基礎材料。 首先，比較了隴東、甘農三號、阿爾崗金、三得利、金皇后等9種基因型苜蓿的子葉和胚軸在不同培養(yǎng)基上的愈傷形成及分化能力。研究結果表明：子葉的再生能力較胚軸強；隴東和

2、甘農一號是9種苜蓿中2種分化能力最強的基因型，其子葉愈傷形成率分別為85.0％和90.0％，分化率均為55.0％；本實驗所設置的F和G培養(yǎng)基分別是子葉和胚軸愈傷形成及分化的最佳培養(yǎng)基。進一步比較了隴東和甘農一號的葉片、胚軸、子葉、莖節(jié)和子葉節(jié)等不同外植體的分化再生能力，莖節(jié)和子葉節(jié)在G培養(yǎng)基上可以直接分化出苗，以子葉起源的外植體較胚軸和葉片起源的外植體分化時間短且叢生芽形成數(shù)量高。再生芽可在原培養(yǎng)基上直接分化出苗并在蔗糖濃度為10mg/

3、L的1/2MS培養(yǎng)基上生根。 然后，用植物表達載體pBI121-AtPCS1轉化農桿菌LBA4404，經菌落PCR鑒定獲得陽性菌，通過葉盤法以重組的農桿菌侵染隴東和甘農一號不同的外植體，通過GUS組織化學染色及對抗性愈傷的形成率進行分析表明，子葉是適合轉化的最佳外植體；隴東和甘農一號苜蓿的轉化效率無顯著差異；真空處理可以提高轉化效率。轉化后的外植體在含有卡那霉素和羧芐青霉素的F培養(yǎng)基上分化出芽，在1/2Ms培養(yǎng)基上生根。