FUS-TLS在肌萎縮側(cè)索硬化癥SOD1 G93A轉(zhuǎn)基因小鼠異常表達和分布導(dǎo)致運動神經(jīng)元進行性變性的研究.pdf

1、目的：
　　利用G93A-SOD1轉(zhuǎn)基因小鼠作為肌萎縮側(cè)索硬化（ALS）動物模型，初步探明ALS小鼠不同疾病階段脊髓受損解剖區(qū)神經(jīng)元致病蛋白（FUS/TLS）與ALS運動神經(jīng)元進行性死亡之間的相關(guān)性，尋找調(diào)控神經(jīng)元致病蛋白FUS/TLS在ALS小鼠的異常表達及分布，為ALS的發(fā)病機制探索可能途徑。
　　方法：
　　構(gòu)建G93A-SOD1C57BL/6J轉(zhuǎn)基因小鼠動物模型，用PCR技術(shù)檢測和篩選出動物模型，甲醛固定G93

2、A-SOD1轉(zhuǎn)基因小鼠，完整取出小鼠脊髓、腦，經(jīng)梯度脫水、包埋，做冰凍切片；行熒光免疫組織化學雙標技術(shù)，分別標記神經(jīng)元致病蛋白肉瘤融合/脂肪肉瘤轉(zhuǎn)運蛋白(FUS/TLS)、神經(jīng)元細胞，星形膠質(zhì)細胞、少突膠質(zhì)細胞。每一解剖區(qū)同時進行雙重熒光免疫組織化學染色，在熒光顯微鏡的同一視野、同一放大倍數(shù)下進行觀察，并用圖像處理技術(shù)將不同染色的陽性細胞兩兩疊加成像，統(tǒng)計并分析不同疾病階段、不同解剖區(qū)域FUS/TLS陽性細胞分布特征及數(shù)量，以及與各類神

3、經(jīng)細胞之間的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1、FUS/TLS在SOD1野生型轉(zhuǎn)基因小鼠和SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠的未發(fā)病階段脊髓中幾乎無表達，只在SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)病期、進展期的脊髓中表達。
　　2、FUS/TLS在SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠的發(fā)病期和進展期階段的表達因脊髓不同解剖區(qū)域而顯著不同，依次為胸段>頸段>腰段，前索>側(cè)索>灰質(zhì)前角>中央管周圍灰質(zhì)>灰質(zhì)后角>后索。
　　3、FUS/TLS的異常表達

4、發(fā)生在星形膠質(zhì)細胞中，而在其它的神經(jīng)細胞如神經(jīng)元細胞和少突膠質(zhì)細胞未見陽性表達。
　　4、FUS/TLS僅在SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)病期的星形膠質(zhì)細胞細胞核中表達，而在進展期時幾乎所有的FUS/TLS在星形膠質(zhì)細胞細胞質(zhì)中表達，少量在細胞核中表達。
　　5、FUS/TLS在SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠的發(fā)病期和進展期中脊髓的表達量和神經(jīng)元死亡呈負相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論：
　　FUS/TLS在ALSSOD1G93A