肌萎縮側(cè)索硬化SOD1基因突變的檢測.pdf

1、肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)是由腦和脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元進(jìn)行性退變引起的一種致死性癱瘓性疾病，散發(fā)性ALS占患病人群的絕大多數(shù)，家族性ALS占5-10％，通常表現(xiàn)為常染色體顯性遺傳。該病的發(fā)病機(jī)制目前還不清楚，臨床治療非常困難。研究表明，銅、鋅超氧化物歧化酶1(SOD1)突變基因存在于20％的家族性患者人群和少數(shù)散發(fā)性患者人群中，某些突變還具有地域分布和特殊臨床表型的規(guī)律性。因此對(duì)于ALS-SOD1基因突變的研究對(duì)揭示疾病發(fā)病機(jī)制、尋找新的治療途

2、徑有著重要的意義。 目的：檢測我國家族性及散發(fā)性患者人群中SOD1基因突變的分布特點(diǎn)，并確定該突變位點(diǎn)所在外顯子的突變頻率，以期與不同國家和地區(qū)的患者人群比較；擬在我國的SOD1基因突變?nèi)巳褐邪l(fā)現(xiàn)其臨床表型的特征性和地域分布的規(guī)律性。 方法：提取人外周血白細(xì)胞基因組DNA，采用SOD1基因的5對(duì)引物對(duì)其5個(gè)外顯子進(jìn)行PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物直接測序。歸納整理患者臨床表型資料，進(jìn)行表型—基因型關(guān)聯(lián)分析。 結(jié)果： 1

3、.在一個(gè)ALS家系的16名成員中，有5名患者通過測序發(fā)現(xiàn)具有位于5號(hào)外顯子的雜合突變，即E133V突變。該家系臨床表型為中年起病，快速進(jìn)展的病程，平均生存時(shí)間4+/-1年。 2.在散發(fā)性患者人群中發(fā)現(xiàn)一名20歲的年輕男性患者，具有位于3號(hào)外顯子的雜合突變，即G72C突變。其父親也發(fā)現(xiàn)了同樣的突變，但并無發(fā)病的臨床表現(xiàn)，追溯病史發(fā)現(xiàn)其父親的姐姐有類似病史。因此認(rèn)為該名患者系家系遺傳。先證者臨床表現(xiàn)為較早發(fā)病，快速進(jìn)展的病程，生存時(shí)

4、間只有1年。 3.在63名散發(fā)性ALS患者中發(fā)現(xiàn)有2名患者具有兩種雜合突變，均為新的錯(cuò)義突變類型。 1)一名46歲的女性患者，臨床表型為以上肢癥狀起病，隨后累及球部，病程至今已有3年，具有位于2號(hào)外顯子的雜合突變，即新的V29A突變。 2)一名19歲的男性患者，以舌肌萎縮為首發(fā)癥狀，具有位于4號(hào)外顯子的雜合突變，即新的N86I突變。 4.本研究的ALS散發(fā)性患者人群SOD1突變的檢出率是3.1％(2/63

5、)，與歐美國家(0-7％)比較處于居中水平。 結(jié)論： 1.本研究為國內(nèi)首次進(jìn)行的散發(fā)性ALS患者SOD1突變分析，填補(bǔ)了國內(nèi)這一研究領(lǐng)域的空白。SOD1突變的檢出率與歐美國家相當(dāng)，在突變頻率上中國SALS患者人群與國際上沒有明顯差異。 2.本研究發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)存在SOD1突變的家系，兩個(gè)家系的遺傳特性均為常染色體顯性遺傳，表現(xiàn)為不完全外顯。 3.本研究發(fā)現(xiàn)的四種突變分布在SOD1基因的2、3、4和5號(hào)等四個(gè)外

6、顯子上，與國外關(guān)于該突變的研究結(jié)果一致。其中三種新的突變類型使國際上整個(gè)突變基因型的數(shù)目由119個(gè)增加至122個(gè)。 4.位于編碼區(qū)第29位的突變(V29A)，是首次在Q22和G37之間的這14個(gè)位點(diǎn)上發(fā)現(xiàn)的突變，證明突變位點(diǎn)并不存在“盲區(qū)”，整個(gè)編碼區(qū)全長都可以存在。 5.具有G72C突變的患者，由于突變外顯率低導(dǎo)致家族成員不發(fā)病，臨床上沒有家族成員患病的病史，因此被診斷為散發(fā)性。因此對(duì)散發(fā)性患者及其家族成員同時(shí)檢測SO