MicroRNA-99a通過BMPR2基因靶向調(diào)節(jié)大鼠間充質(zhì)干細胞的早期軟骨細胞分化.pdf

1、目的：間充質(zhì)干細胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）是關(guān)節(jié)軟骨再生的重要來源，因為MSCs具有軟骨細胞分化的潛能，并且易于獲取且可在體外擴增。目前，可調(diào)節(jié)軟骨形成的特定microRNAs（miRNAs）尚未明確，其相關(guān)機制也未清晰，本研究旨在找出這些特定microRNAs并研究其機制。
　　方法：應(yīng)用Real-time PCR、Western blot、免疫熒光顯微技術(shù)和阿新藍染色分析早期軟骨細胞分化中mi

2、RNAs、BMPR2、蛋白多糖、 ACAN和COL2A1的表達水平。應(yīng)用雙熒光素酶報告基因分析驗證miRNAs和BMPR2的靶向關(guān)系。
　　結(jié)果：miRNAs通過與目標 mRNA結(jié)合來降低蛋白質(zhì)的合成，從而調(diào)節(jié)生物學(xué)過程。本研究中我們發(fā)現(xiàn)，在挪威棕色大鼠（Rattus Novegicus）間充質(zhì)干細胞（ rMSCs）早期軟骨細胞分化過程中， miR-99a和miR-125b-3p的表達明顯升高。而抑制 miR-99a，能夠促進軟骨

3、細胞早期分化過程中蛋白多糖的沉積，并增加ACAN和COL2A1的表達。因此，調(diào)低miR-99a的表達能夠促進rMSCs的早期軟骨細胞分化。雙熒光素酶報告基因檢測表明，miR-99a作用于骨形態(tài)發(fā)生蛋白Ⅱ型受體（bone morphogenetic protein receptor type2，BMPR2）的3'-UTR上的一個假定的結(jié)合位點，miR-99a的過表達能夠降低BMPR2蛋白的表達水平。在rMSCs早期軟骨細胞分化的過程中，總

4、p38和p-p38的表達在分化的第7天和第14天時增加；而在rMSC早期軟骨細胞分化的過程中，總p38和p-p38蛋白下降的水平取決于miR-99a過表達的水平。在 rMSC早期軟骨細胞分化過程中，BMPR2的沉默能夠逆轉(zhuǎn)miR-99a對蛋白多糖沉積、ACAN、COL2A1以及總p38蛋白、p-p38蛋白表達的抑制作用。
　　結(jié)論：這個大鼠間充質(zhì)干細胞體外實驗的研究結(jié)果，為miR-99a在早期軟骨細胞分化中所扮演的角色提供了實驗證