針?biāo)幗Y(jié)合誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化為軟骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察針?biāo)幗Y(jié)合對體外培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及糖胺聚糖含量、Ⅱ型膠原表達(dá)的影響，以探討針?biāo)幗Y(jié)合對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化的定向誘導(dǎo)作用和輔助改善作用。
　　 方法：取20只SD大鼠，電針針刺7天，頸總動(dòng)脈取血制備血清。另取30只4周齡SD大鼠骨髓中分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，體外傳代培養(yǎng)，取第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分為對照組、針刺血清組、丹參注射液組及針?biāo)幗M，通過不同條件誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化。倒置顯微鏡

2、下觀察原代培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)變化，運(yùn)用MTT法觀察各組對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響，采用阿利新藍(lán)法計(jì)算各組培養(yǎng)液內(nèi)糖胺聚糖(GAG)含量并比較各組之間分泌GAG的不同，運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色方法檢測各組中軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：①剛分離接種的細(xì)胞鏡下呈圓形，大小不一，數(shù)目較多，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，貼壁細(xì)胞聚集生長，呈集落狀態(tài)，細(xì)胞形態(tài)為典型梭形細(xì)胞。原代培養(yǎng)約6-7d左右，細(xì)胞融合成單層，細(xì)胞梭形突起變長

3、，排列有明顯方向性。培養(yǎng)約10d左右，細(xì)胞融合約80％。傳代后生長更加迅速，傳代細(xì)胞呈均一長梭形、多角形、短梭形，緊密排列似旋渦狀。②與對照組相比，丹參注射液及針?biāo)幗Y(jié)合均能夠促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖(P＜0.05)，針?biāo)幗M作用更明顯(P＜0.01)；針刺血清不能促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖（P＞0.05）。③丹參注射液組及針?biāo)幗Y(jié)合組培養(yǎng)液GAG的含量與對照組GAG的含量相比有明顯升高(P＜0.05)，針?biāo)幗M更為明顯(P＜0.01)；針刺

4、血清則不能提高培養(yǎng)液GAG的含量（P＞0.05）。④免疫組織化學(xué)染色Ⅱ型膠原陽性表達(dá)為棕黃色染色，主要定位于細(xì)胞外基質(zhì)，丹參組和針?biāo)幗M均有Ⅱ型膠原表達(dá)，針?biāo)幗M比丹參組表達(dá)強(qiáng)；針刺組和對照組沒有Ⅱ型膠原表達(dá)。結(jié)果表明針?biāo)幗M可以有效的促進(jìn)Ⅱ型膠原表達(dá)，較丹參組效果好，針刺組并不能促進(jìn)Ⅱ型膠原的表達(dá)。
　　 結(jié)論：復(fù)方丹參注射液和針?biāo)幗Y(jié)合的方法均能夠促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖，并能夠誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為軟骨細(xì)胞，針刺血清沒有這種