力學(xué)刺激對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化的研究.pdf

1、目的:在微團(tuán)培養(yǎng)條件下探討不同離心力對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化的影響與作用。
　　 方法:取6周齡的SD大鼠，在無(wú)菌條件下分離出股骨和脛骨并抽取骨髓，使用密度梯度離心法提取原代BMSCs，并經(jīng)過(guò)反復(fù)換液和傳代得到純化的BMSCs，使用流式細(xì)胞儀測(cè)出CD29、 CD90和CD45的含量，鑒定細(xì)胞的純度。取第6代BMSCs采用微團(tuán)方式進(jìn)行立體培養(yǎng)，在培養(yǎng)過(guò)程中更換以TGF-β1，ITS為主要成分的誘導(dǎo)培養(yǎng)基并根據(jù)離心力強(qiáng)度將細(xì)

2、胞分為4組:無(wú)應(yīng)力對(duì)照組、100g應(yīng)力組、200g應(yīng)力組和300g應(yīng)力組。誘導(dǎo)培養(yǎng)28天后，對(duì)細(xì)胞團(tuán)塊進(jìn)行鑒定和比較。鑒定指標(biāo)主要為大體觀察細(xì)胞團(tuán)塊的形態(tài)、光澤度等;臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞活度;甲苯胺藍(lán)染色測(cè)定蛋白聚糖的合成和Ⅱ型膠原免疫組化檢測(cè)Ⅱ型膠原含量。
　　 結(jié)果:
　　 1、BMSCs原代細(xì)胞早期接種時(shí)，細(xì)胞呈類圓形，48小時(shí)后少許細(xì)胞貼壁，并逐漸延伸成長(zhǎng)梭性。約7日后即可見(jiàn)明顯的集落形成，與周圍的集落漸漸的融合，

3、2周后，細(xì)胞基本融合達(dá)90％，排列緊密而有序，至第5代時(shí)細(xì)胞形態(tài)更加規(guī)矩，單個(gè)細(xì)胞已成一致的狹長(zhǎng)梭形，排列緊密有序，集落中心呈旋渦狀生長(zhǎng)。
　　 2、BMSCs流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果: CD29表達(dá)率為97.36％，CD90表達(dá)率為99.61％，均為強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng);CD45表達(dá)率為0.44％為陰性反應(yīng)。說(shuō)明此BMSCs細(xì)胞樣本純度很高，符合本實(shí)驗(yàn)要求。
　　 3、BMSCs經(jīng)28天誘導(dǎo)后，于離心管底部肉眼可見(jiàn)的銀白色小質(zhì)塊，，球

4、形，略有光澤，用鑷子夾之韌性較差，各分組間細(xì)胞團(tuán)塊的大小，色澤無(wú)明顯差異。
　　 4、BMSCs經(jīng)28天誘導(dǎo)后臺(tái)盼藍(lán)染色結(jié)果:無(wú)應(yīng)力，100g，200g三組之間細(xì)胞活力無(wú)明顯差異，而300g應(yīng)力組的細(xì)胞活力則較前三組明顯降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 5、BMSCs經(jīng)28天誘導(dǎo)后甲苯胺藍(lán)染色:200g應(yīng)力組胞外基質(zhì)有較明顯的紫紅色異染，100g組和300g組異染性較差，無(wú)應(yīng)力對(duì)照組最差。
　　 6、