體外通過(guò)細(xì)胞共培養(yǎng)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化的條件初探.pdf

1、【目的】誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)向軟骨細(xì)胞分化一直是軟骨組織工程的熱點(diǎn)問(wèn)題，但這一研究卻面臨誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞在體內(nèi)無(wú)法長(zhǎng)期維持其軟骨細(xì)胞表型，以及誘導(dǎo)需要消耗大量昂貴的生長(zhǎng)因子的難題。本研究通過(guò)將BMSCs與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)，觀察軟骨細(xì)胞能否對(duì)BMSCs向軟骨細(xì)胞分化起誘導(dǎo)作用，并且比較共培養(yǎng)中不同培養(yǎng)條件對(duì)BMSCs向軟骨細(xì)胞分化的差別。 【方法】選擇4月齡馬來(lái)豬，分別從股骨與膝關(guān)節(jié)中取出骨髓與軟骨組織，并進(jìn)一步分離出B

2、MSCs與軟骨細(xì)胞。對(duì)原代BMSCs與軟骨細(xì)胞在含血清培養(yǎng)液中進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)。1)BMSCs與軟骨細(xì)胞的P2代細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，以BMSCs：軟骨細(xì)胞為4：1，細(xì)胞總密度0．5×104cell／cm2，接種于培養(yǎng)皿內(nèi)，以BMSCs單獨(dú)培養(yǎng)，軟骨細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)，軟骨細(xì)胞低密度單獨(dú)培養(yǎng)作為對(duì)照組，再將所有實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞培養(yǎng)于不同培養(yǎng)液(含血清培養(yǎng)液或無(wú)血清培養(yǎng)液)中。對(duì)培養(yǎng)第7、14、21天的細(xì)胞進(jìn)行倒置相差顯微鏡、H&E染色以及免疫熒光標(biāo)記II型

3、膠原觀察。2)將共培養(yǎng)7天初步融合的共培養(yǎng)組細(xì)胞進(jìn)行傳代，待再次融合后用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。 【結(jié)果】1)根據(jù)倒置相差顯微鏡與H&E染色對(duì)細(xì)胞形態(tài)的觀察，BMSCs的形態(tài)為成纖維細(xì)胞樣，軟骨細(xì)胞為橢圓形或多角形。在兩種培養(yǎng)液中的共培養(yǎng)組細(xì)胞隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞形態(tài)由梭形，逐漸轉(zhuǎn)變成橢圓形與多角形，但是在無(wú)血清培養(yǎng)液中，細(xì)胞數(shù)目沒(méi)有明顯增加。根據(jù)免疫熒光結(jié)果，在BMSCs中工I型膠原表達(dá)陰性，軟骨細(xì)胞II型膠原表達(dá)陽(yáng)性，