直接共培養(yǎng)誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化的研究.pdf

1、目的:
　　探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord-drived mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)與人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞（human articular chondrocytes, hACs）直接共培養(yǎng)對hUC-MSCs向軟骨細(xì)胞分化的影響及直接共培養(yǎng)的最佳比例。
　　方法:
　　體外消化人關(guān)節(jié)軟骨組織并分離出軟骨細(xì)胞，單層培養(yǎng)擴增至P2代并通過免疫熒光鑒定表型。分離

2、培養(yǎng)hUC-MSCs，單層培養(yǎng)擴增至P3代并通過流式細(xì)胞儀鑒定表面標(biāo)志分子。直接共培養(yǎng)組：按照hUC-MSCs與hACs細(xì)胞比例為1:1，3:1及5:1(hUC-MSCs:hACs)進(jìn)行共培養(yǎng)。陽性對照組：軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基單獨培養(yǎng)hUC-MSCs。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)檢測II型膠原(COLⅡ)的表達(dá)水平； Western blot檢測細(xì)胞SOX9、COL I、COL II蛋白表達(dá)水平；實時熒光定量qRT-PCR檢測SOX9、Col1a1、Co

3、l2a1 mRNA表達(dá)；ELISA檢測TGF-β1的表達(dá).
　　結(jié)果:
　　成功分離并鑒定 hUC-MSCs和 hACs，hUC-MSCs與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)28 d后，共培養(yǎng)組及單獨藥物誘導(dǎo)的陽性對照組免疫熒光檢測均呈陽性。陽性對照組的 Col2a1 mRNA表達(dá)水平高于共培養(yǎng)組，但陽性對照組 COL II蛋白表達(dá)量低于共培養(yǎng)組。1:1共培養(yǎng)組Col2a1 mRNA表達(dá)水平高于3:1和5:1共培養(yǎng)組，但共培養(yǎng)組內(nèi) COL II

4、蛋白表達(dá)量無明顯差異。陽性對照組和共培養(yǎng)組的 Col1a1 mRNA和COL I蛋白表達(dá)水平均低于hACs空白對照組。
　　結(jié)論:
　　hUC-MSCs和 hACs直接共培養(yǎng)可明顯促進(jìn) hUC-MSCs向軟骨樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化，并有效抑制細(xì)胞向成纖維細(xì)胞方向分化，直接共培養(yǎng)體系的適宜接種比例或為5:1(hUC-MSCs:hACs)。直接共培養(yǎng)誘導(dǎo) hUC-MSCs向軟骨細(xì)胞分化是一種較為經(jīng)濟(jì)高效的誘導(dǎo)方法，可為軟骨組織工程提供表