骨髓間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞轉(zhuǎn)化的實驗研究.pdf

1、目的：檢測pcDNA3-FGF-β1 表達載體瞬時和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染對兔骨髓基質(zhì)干細胞 TGF-β1蛋白表達的影響及其誘導骨髓基質(zhì)干細胞向軟骨細胞方向分化的可行性，為修復軟骨損傷的實驗研究提供實驗依據(jù)。 方法：用密度梯度離心法和貼壁法分離純化骨髓間充質(zhì)干細胞，并傳代擴增后，通過免疫組織化學鑒定細胞。脂質(zhì)體介導 pcDNA3-TGF-β1 表達載體轉(zhuǎn)染第三代兔骨髓基質(zhì)干細胞，免疫組化法檢測法檢測瞬時 TGF-β1 蛋白表達。應用G418篩

2、選陽性克隆，同法檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染組細胞 TGF-β1 蛋白表達。持續(xù)培養(yǎng)各組細胞，連續(xù)觀察細胞的形態(tài)變化并記錄其特點，以未轉(zhuǎn)染空載體細胞為實驗對照組，未轉(zhuǎn)染細胞為空白對照組，培養(yǎng)2周、4周后檢測各組細胞型Ⅱ膠原的表達情況。 結(jié)果：體外成功建立兔骨髓基質(zhì)干細胞分離擴增傳代的方法。免疫組化結(jié)果顯示pcDNA3-TGF-β1 表達載體瞬時轉(zhuǎn)染后細胞內(nèi)有TGF-β1 蛋白表達。經(jīng)G418篩選2周，獲得穩(wěn)定表達克隆，免疫組化結(jié)果顯示：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

3、組細胞有明顯的TGF-β1 蛋白表達。轉(zhuǎn)染細胞第 2 周，抗Ⅱ型膠原免疫組織化學染色實驗組可見細胞內(nèi)陽性顆粒，實驗對照組及空白對照組均為陰性，培養(yǎng)4周后細胞形態(tài)變?yōu)?角型，實驗組有明顯Ⅱ型膠原表達。實驗對照組及空白對照組均為陰性實驗對照組及空白對照組相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結(jié)論：脂質(zhì)體法重組 pcDNA3-TGF-β1 基因可成功轉(zhuǎn)染兔 MSCs，轉(zhuǎn)染細胞表達TGF-β1，并可誘導轉(zhuǎn)染細胞分泌Ⅱ型膠原蛋白，表