肺癌中調(diào)節(jié)性B細(xì)胞對(duì)免疫的抑制作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：分析肺癌病人外周血中CD19+CD20-B細(xì)胞表型特點(diǎn)，為其免疫抑制功能提供理論依據(jù)。通過肺癌細(xì)胞上清誘導(dǎo)B細(xì)胞，檢測(cè)對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)，驗(yàn)證肺癌中抑制性B細(xì)胞的存在。
　　內(nèi)容和方法：收集26例肺癌初治患者及11例健康人外周血，所有患者均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)為肺癌。用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肺癌患者和健康人外周血中CD19+B細(xì)胞及其亞群 CD19+CD20-B細(xì)胞比例，并比較患者和健康人之間的差異。分析26例肺癌患者外周血 B細(xì)胞中

2、 CD19+CD20-B細(xì)胞的比例，結(jié)合臨床病理資料分析CD19+CD20-B細(xì)胞比例和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及肺癌分期等臨床指標(biāo)的關(guān)系。通過多色流式分析的方法檢測(cè)肺癌患者外周血 CD19+B細(xì)胞中 CD19+CD20-及CD19+CD20+B細(xì)胞亞群的表型分子特點(diǎn),分析抑制性分子 PD-1、CTLA-4和Tim-1在兩群細(xì)胞上的不同表達(dá)水平。分析兩者之間 CD62L、CCR6、CD27、C24以及CD38表達(dá)的差異；收集肺癌組織及癌旁組

3、織標(biāo)本，檢測(cè)并比較癌和癌旁組織浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的密度。將分選的外周血B細(xì)胞分別在加入刺激因子TNF家族B細(xì)胞活化因子（B cell-activating factor belonging to the TNF family，BAFF）的培養(yǎng)液及加入腫瘤細(xì)胞系 NCI-H1299、NCI-520培養(yǎng)上清的培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，比較三種方案培養(yǎng)后B細(xì)胞表型分子的變化，同時(shí)比較不同上清刺激后的B細(xì)胞對(duì)CD4+及CD8+T細(xì)胞增殖抑制程度的差異。

4、>　　結(jié)果：流式分析結(jié)果顯示，與健康人相比，肺癌患者外周血中CD19+B細(xì)胞比例顯著下降（ p=0.0013）。CD19+CD20-B細(xì)胞在肺癌患者比例高于健康人(p=0.0379)。進(jìn)一步將肺癌患者分成轉(zhuǎn)移組（包括淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移）和非轉(zhuǎn)移組，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移組CD19+CD20-B細(xì)胞顯著高于非轉(zhuǎn)移組（p=0.0341），但是未能發(fā)現(xiàn)CD19+CD20-B細(xì)胞比例與肺癌患者的其他臨床病理特征（性別、年齡、腫瘤大小、臨床分期等）有關(guān)。多色

5、流式分析結(jié)果顯示在人外周血CD19+B細(xì)胞亞群中，與CD19+CD20+B細(xì)胞相比，CD19+CD20-B細(xì)胞中高表達(dá)抑制性分子PD-1（p＜0.0001）、CTLA-4（p＜0.0001）和Tim-1（p＜0.0001），說明CD19+D20-B細(xì)胞代表一群具有免疫抑制作用的 B細(xì)胞亞群；同時(shí)低表達(dá) CD62L，說明CD19+CD20-B細(xì)胞無法到達(dá)脾臟、淋巴結(jié)等次級(jí)淋巴器官，接受抗原刺激而發(fā)育成為成熟的漿細(xì)胞；而低表達(dá)CCR6則說明

6、其不能有效地啟動(dòng)體液免疫應(yīng)答。CD19+CD20-B細(xì)胞較CD19+CD20+B細(xì)胞高表達(dá)CD38（p＜0.0001），高表達(dá)CD27（p＜0.0001），低表達(dá)CD24（p＜0.0001），說明肺癌中CD19+CD20-B細(xì)胞與免疫相關(guān)性疾病中調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（regulatory B cell, Breg）有所差異。與癌旁組織相比，癌組織浸潤(rùn)較多的 CD19+B細(xì)胞（p=0.0070）和 CD19+CD20- B細(xì)胞（p=0.0120）

7、。功能實(shí)驗(yàn)顯示，與BAFF刺激組相比，肺癌細(xì)胞系NCI-H1299上清刺激后的B細(xì)胞可以誘導(dǎo)產(chǎn)生一群表型為CD19+CD20-B細(xì)胞，而NCI-H520肺癌細(xì)胞上清刺激組則未誘導(dǎo)產(chǎn)生該群細(xì)胞。將三組B細(xì)胞分別與CD3+T細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，檢測(cè)CD3+T細(xì)胞中CD4+及CD8+T細(xì)胞的增殖情況，體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，NCI-H1299上清培養(yǎng)后的B細(xì)胞對(duì)CD4+及CD8+T細(xì)胞增殖均具有明顯的抑制效應(yīng)。
　　結(jié)論：肺癌病人外周血CD19+