桑根皮素對(duì)人肝癌細(xì)胞和肺癌細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制探討.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以湖桑32號(hào)栽培桑的桑枝條皮中提取到的桑根皮素為研究對(duì)象，通過小鼠的毒理試驗(yàn)和觀察桑根皮素對(duì)二種人肝癌和肺癌細(xì)胞生長的影響，研究了桑根皮素對(duì)人肝癌細(xì)胞Bel-7402和人肺癌細(xì)胞A549增殖的抑制作用和凋亡誘導(dǎo)作用，并初步探討其作用機(jī)制，為蠶桑產(chǎn)業(yè)的最大廢棄物—桑枝資源的綜合利用和生物活性物質(zhì)—桑根皮素藥用研發(fā)以及臨床應(yīng)用研究提供必要的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　本文的研究主要涉及以下內(nèi)容：
　?。?）本文進(jìn)行了桑根皮素對(duì)正

2、常小鼠的毒性試驗(yàn)。采用腹腔注射的方式，用桑根皮素處理正常ICR小鼠，調(diào)查了桑根皮素對(duì)正常小鼠生長與發(fā)育的影響。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，桑根皮素以40 mg/kg劑量皮下注入小鼠后，樣品處理組的小鼠體重略有下降，肝臟指數(shù)和肺臟指數(shù)也有增大，但是與正常組相比，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析上沒有顯著性差異。同時(shí)小鼠血清中GOT和GPT兩種肝功能指標(biāo)的活性也與正常組沒有顯著性差異。觀察小鼠肝臟和肺臟HE染色切片，可以發(fā)現(xiàn)桑根皮素處理組小鼠肝臟沒有明顯的損傷，但是對(duì)肺臟

3、有輕微的副作用。但綜合上述結(jié)果可以得出，皮下注射桑根皮素對(duì)正常小鼠的生長和發(fā)育沒有明顯的毒性作用，但是對(duì)小鼠的肺臟還是有一定程度的損傷。
　?。?）本文研究了桑根皮素對(duì)人肝癌細(xì)胞Bel-7402的抑制作用。實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組（模型組）和不同濃度的桑根皮素處理組（10μg/ml、50μg/ml和100μg/ml），分別研究了桑根皮素對(duì)細(xì)胞的增殖、凋亡、抗氧化水平以及腫瘤相關(guān)基因表達(dá)水平的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，桑根皮素濃度50μg/ml

4、和100μg/ml時(shí)，作用于Bel-7402細(xì)胞24 h后，可顯著抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，降低存活率，與空白對(duì)照組相比有顯著差異；倒置顯微鏡下可觀察到細(xì)胞皺縮、數(shù)目顯著減少等細(xì)胞凋亡的癥狀；流式細(xì)胞術(shù)分析可知，10μg/ml、50μg/ml和100μg/ml桑根皮素處理細(xì)胞后，這種腫瘤細(xì)胞的凋亡率分別是19.86％、68.2%和81.00%，并且線粒體膜電位也隨著桑根皮素濃度的增加而降低；抗氧化酶活性分析表明，桑根皮素可誘導(dǎo) Bel-740

5、2細(xì)胞抗氧化活力的增加；ELISA分析結(jié)果顯示，桑根皮素處理后可下調(diào)NF-?B表達(dá)和上調(diào)Caspase-3、Caspase-9的表達(dá)；Western Blotting結(jié)果分析表明，桑根皮素處理可上調(diào)P-ERK1/2和P-JNK表達(dá)，通過MAPK途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，桑根皮素可誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)抑癌基因Beclin-1、P53和NF-B(p65)的表達(dá)上調(diào)，從而達(dá)到抑制腫瘤增殖的作用。因此，桑根皮素可通過線粒體途徑和 MAP

6、K途徑等細(xì)胞凋亡的途徑，誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞 Bel-7402細(xì)胞發(fā)生凋亡，進(jìn)而達(dá)到抗腫瘤的作用。
　?。?）本文還研究了桑根皮素對(duì)人肺癌細(xì)胞 A549細(xì)胞的抑制作用。實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組和三種不同濃度的桑根皮素處理組（10μg/ml、50μg/ml和100μg/ml），分別研究了桑根皮素對(duì)這種腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、凋亡、抗氧化水平以及腫瘤相關(guān)基因表達(dá)水平的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，桑根皮素濃度為50μg/ml和100μg/ml時(shí)，作用于A54

7、9細(xì)胞24 h后，可顯著降低其存活率，與空白對(duì)照組相比有顯著差異，倒置顯微鏡下可同樣觀察到細(xì)胞皺縮、數(shù)目明顯減少等細(xì)胞凋亡癥狀；劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同濃度的桑根皮素可顯著降低肺癌細(xì)胞的遷移速率；流式細(xì)胞術(shù)分析可知，以10μg/ml、50μg/ml和100μg/ml三個(gè)劑量的桑根皮素處理細(xì)胞后，細(xì)胞的凋亡率分別為16.46%、55.80%和70.80%；并且線粒體膜電位也隨著濃度的增加而降低；抗氧化酶活性分析表明，桑根皮素可誘導(dǎo)A54