鴉膽子油乳對肺癌NCI-H460細(xì)胞的抑制作用及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、肺癌是人體常見的惡性腫瘤之一，近年來，我國肺癌的發(fā)病率及病死率持續(xù)升高，嚴(yán)重威脅人類健康。鴉膽子油乳為苦木科植物鴉膽子的干燥成熟果實(shí)提取制備的油乳劑。研究表明，鴉膽子油乳具有抗腫瘤及增效減毒和免疫保護(hù)作用。可用于聯(lián)合放療或化療藥物治療癌性胸腔積液、惡性腹腔積液、急性髓細(xì)胞白血病、晚期胃癌、中晚期前列腺癌、食管癌、原發(fā)性肝癌等多種惡性腫瘤，并能提高患者生存質(zhì)量。但目前尚未見用該制劑對大細(xì)胞肺癌作用及其機(jī)制的報(bào)道。
　　 本實(shí)驗(yàn)采用

2、體外細(xì)胞培養(yǎng)法，研究鴉膽子油乳對大細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H460的抑制作用及其作用機(jī)制。研究結(jié)果可為鴉膽子油乳在癌癥的輔助治療方面的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。
　　 方法:
　　 一、細(xì)胞培養(yǎng)
　　 依據(jù)張卓然[1]主編《培養(yǎng)細(xì)胞學(xué)與細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)》中介紹的細(xì)胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)NCI-H460細(xì)胞；用冷凍休克法對培養(yǎng)的細(xì)胞生長進(jìn)行同步化處理。
　　 二、細(xì)胞抑制率的檢測
　　 收集經(jīng)同步化處理后培養(yǎng)

3、的NCI-H460細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，定量轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板中，加入不同濃度藥物，繼續(xù)培養(yǎng)24h、48h和72h后每空加入MTT和二甲基亞砜(DMSO)，常規(guī)方法用酶標(biāo)儀在550nm處測吸光度（OD值），計(jì)算藥物作用不同時間對NCI-H460細(xì)胞的抑制率。
　　 三、凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測
　　 不同濃度鴉膽子油乳作用于細(xì)胞48h后，吉姆薩染色，光學(xué)顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)。
　　 四、細(xì)胞凋亡率的檢測
　

4、　 細(xì)胞加入鴉膽子油乳，繼續(xù)孵育48h，收集不同藥物濃度處理的NCI-H460細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測凋亡率。
　　 五、Caspase-3活性檢測
　　 不同濃度鴉膽子油乳作用于細(xì)胞48h后，酶標(biāo)法檢測NCI-H460細(xì)胞Caspase-3酶活性。
　　 結(jié)果:
　　 一、藥物對細(xì)胞抑制率的檢測結(jié)果
　　 不同濃度的鴉膽子油乳作用24h、48h、72h后，對大細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H460有很強(qiáng)的抑

5、制作用。細(xì)胞的抑制率與時間和藥物濃度有關(guān)，隨著作用時間的延長和藥物濃度的增加，細(xì)胞毒性作用增強(qiáng)，存在時間、劑量依賴性。
　　 二、細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變
　　 吉姆薩染色后，用光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)，對照組細(xì)胞細(xì)胞輪廓清楚，胞核胞漿對比明顯，細(xì)胞核較規(guī)則，核質(zhì)均勻；不同濃度藥物作用48h后，可以看到細(xì)胞外形不規(guī)則，細(xì)胞核裂解為碎塊，核碎片大小不等散于胞漿內(nèi)等細(xì)胞凋亡特征。
　　 三、細(xì)胞凋亡率的檢測結(jié)果
　　

6、 不同濃度鴉膽子油乳作用48h后，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。顯示總體凋亡率升高，早期與晚期共同凋亡率較空白對照組差異具有顯著性。
　　 四、Caspase-3活性檢測結(jié)果
　　 不同濃度鴉膽子油乳作用48h后，酶標(biāo)法檢測NCI-H460細(xì)胞Caspase-3酶活性。Caspase-3酶活性呈劑量依賴性增高，且與空白對照組比較差異具有顯著性。
　　 討論:
　　 本文首次用體外實(shí)驗(yàn)研究鴉膽子油乳對大細(xì)胞肺癌

7、細(xì)胞NCI-H460的抑制作用及其作用機(jī)制。結(jié)果表明，鴉膽子油乳在體外能明顯抑制NCI-H460細(xì)胞的增殖，并呈時間劑量依賴性。
　　 本研究表明鴉膽子油乳作用48h后，吉姆薩染色，在光學(xué)顯微鏡下可觀察到NCI-H460細(xì)胞核碎裂等典型凋亡形態(tài)，從形態(tài)學(xué)上證實(shí)鴉膽子油乳對NCI-H460細(xì)胞具有誘導(dǎo)凋亡的作用。流式細(xì)胞儀檢測凋亡率，顯示總體凋亡率升高，早期與晚期共同凋亡率與空白對照組比較差異具有顯著性。進(jìn)一步證明鴉膽子油乳可以誘

8、導(dǎo)NCI-H460細(xì)胞凋亡。
　　 不同濃度鴉膽子油乳作用48h后，酶標(biāo)法檢測NCI-H460細(xì)胞Caspase-3酶活性呈劑量依賴性增高，且與空白對照組比較差異具有顯著性。認(rèn)為Caspase-3酶活化可能參與了鴉膽子油乳誘導(dǎo)NCI-H460細(xì)胞的凋亡的過程。
　　 結(jié)論:
　　 1．鴉膽子油乳能夠抑制NCI-H460細(xì)胞的增殖，具有時間、劑量依賴性；
　　 2．誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡可能是鴉膽子油乳抑制NCI-H