藍萼甲素對人肺癌A549細胞的抑制作用及其機制.pdf

1、目的：探討藍萼甲素（Glaucocalyxin A,GLA）對人肺癌A549細胞的抑制作用及其作用機制，為GLA的抗腫瘤作用及用于臨床提供進一步的實驗依據。
　　方法：以不同濃度的GLA干預體外培養(yǎng)人肺癌A549細胞,用MTT法觀察其對A549細胞增殖的影響,流式細胞儀檢測細胞凋亡率及細胞周期變化; Hoechst33258染色觀察給藥后A549細胞核形態(tài)的變化，透射電鏡（TEM）觀察A549細胞超微結構的改變,掃描電鏡(SEM)

2、觀察A549細胞表面結構改變;western blot法檢測GLA對caspase-3、8和PARP蛋白表達的改變。RT-PCR方法檢測GLA對A549細胞內caspase-3、8和PARP基因表達的影響。實時定量(Real time)PCR檢測A549細胞內microRNA30a的表達情況。
　　結果：GLA對體外培養(yǎng)A549細胞具有增殖抑制作用（P＜0.05，P＜0.01），并呈劑量和時間依賴趨勢；Hoechst33258染色

3、后，熒光顯微鏡下可見A549細胞胞核致密濃染;TEM觀察可見A549細胞核皺縮、染色質邊集等細胞凋亡的特征性改變；SEM觀察可見A549細胞微絨毛減少，部分細胞膜表面出現一些大小不一的凹陷或孔洞。流式細胞儀PI單染結果顯示不同濃度GLA作用A549細胞48h后，S期細胞比例增加（P＜0.05）；AnnexinⅤ-FITC雙染結果顯示不同濃度GLA作用于A549細胞48h后,細胞凋亡率逐漸增加（P＜0.01），3-甲基腺嘌呤(3-MA)與

4、GLA聯(lián)合應用可使細胞凋亡率增加（P＜0.05）；GLA干預A549細胞后Western blot檢測結果:caspase3、caspase8、PARP蛋白表達上調，且均呈劑量依賴趨勢；RT-PCR結果：caspase-3mRNA、caspase-8mRNA、PARPmRNA的表達上調（P＜0.05），Real time PCR結果表明，microRNA30a表達下調（P＜0.05）。
　　結論：藍萼甲素(GLA)對體外培養(yǎng)人肺癌