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文檔簡介
1、目的:檢測miR-155在肝癌標本及細胞系中的表達情況,探討miR-155在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的生物學功能,并探究其與肝癌侵襲轉移的關系,為肝癌的診治及預后判斷提供新的策略。
方法:1、用人肝癌細胞HepG2和HuH7和正常肝細胞HL-7702,并收集30例原發(fā)性肝癌癌組織標本,癌旁組織,12例正常肝組織標本,運用qRT-PCR技術檢測miR-155在肝癌組及正常對照組中的表達。2、由慢病毒介導將基因miR-155轉染至miR
2、-155表達量低的細胞株(HuH-7)中,將抑制劑 inhibitor(miR-155 inhibitor)轉染至表達量高的細胞株(HepG2)中,通過MTT檢測細胞增殖,流式細胞儀技術檢測轉染后細胞周期變化,以及應用劃痕愈合試驗、Transwell試驗了解其對細胞遷移、侵襲的影響。3、通過qRT-PCR技術檢測上皮間質轉化(EMT)表型相關因子基因的表達及Western blot檢測相關蛋白的表達,分析miR-155與EMT的關系。4
3、、通過qRT-PCR分析miR-155與腫瘤大小及有無遠處轉移的關系,了解其對原發(fā)性肝癌發(fā)生、發(fā)展及預后的影響。
結果:1、miR-155在肝癌細胞系中的表達明顯高于對照組,其中HepG2細胞株表達量較高,HuH7細胞株表達量較低,miR-155在肝癌組織中的表達量明顯高于癌旁組織和正常組織(P<0.05)。2、HuH7細胞株在轉染miR-155后細胞增殖和細胞周期變化不明顯,細胞的遷移及侵襲能力增強,轉染miR-155 in
4、hibitor至HepG2細胞株后,細胞增殖和細胞周期變化也不明顯,而細胞的遷移及侵襲能力減弱。3、HuH7細胞株在轉染miR-155后上皮表型CDH1的mRNA及蛋白表達減少,而間質表型snai1和zeb1的mRNA及蛋白表達增加。HepG2細胞株在轉染miR-155 inhibitor后,呈現(xiàn)出相反的結果。4、臨床統(tǒng)計分析miR-155與肝癌的大小無關,與有無遠處轉移明顯相關。
結論:本實驗表明 miR-155在肝癌細胞中
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