Bmi-1在肝癌組織中的表達(dá)及其與肝癌細(xì)胞侵襲遷移能力的影響.pdf

1、Bmi-1基因(BlymphomaMo-MLVinsertionregion1homolog,Bmi-1)屬于核染色質(zhì)調(diào)控因子多梳基因(Polycombgroup,PcG)家族，直接參與細(xì)胞周期、凋亡和衰老的調(diào)控，為維持神經(jīng)和造血干細(xì)胞的自我更新所必需，在胚胎發(fā)育中發(fā)揮重要作用。近來(lái)，大量研究證實(shí)Bmi-1在許多腫瘤中表達(dá)失調(diào)，并且與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移惡性表型和不良預(yù)后顯著相關(guān)。研究表明Bmi-1在原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌(hepatocellut

2、arcarcinoma,HCC)中表達(dá)上調(diào)，但其在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用卻存在較大的爭(zhēng)議。一些研究表明Bmi-1主要表達(dá)在早期和高分化肝癌中，Bmi-1的表達(dá)與肝癌的惡性進(jìn)展無(wú)關(guān)。而另外一些研究表明Bmi-1主要表達(dá)在低分化肝癌中，Bmi-1的表達(dá)與肝癌的進(jìn)展和侵襲惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)。兩者的研究結(jié)果相互矛盾。為了研究Bmi-1是否與肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移行為相關(guān)，設(shè)計(jì)并實(shí)施了如下實(shí)驗(yàn)：
　　目的：檢測(cè)Bmi-1在肝癌組織中的表達(dá)情況。下

3、調(diào)Bmi-1在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)，以探討其在肝癌細(xì)胞系MHCC97-H侵襲轉(zhuǎn)移中的作用，為肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移提供一個(gè)新的思路。
　　方法：采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)46例肝癌組織及對(duì)應(yīng)的癌旁組織和16例正常肝組織標(biāo)本中Bmi1基因的表達(dá)，并分析其與肝癌臨床指標(biāo)之間的關(guān)系。設(shè)計(jì)并合成針對(duì)Bmi-1基因序列特異性的雙鏈小干擾RNA(Bmi-1-siRNA),轉(zhuǎn)染高轉(zhuǎn)移性人肝癌細(xì)胞株MHCC97-H,用流式細(xì)胞儀觀察轉(zhuǎn)染效率,熒光實(shí)時(shí)定量P

4、CR和Westernblot分別檢測(cè)Bmi-1基因的mRNA和蛋白表達(dá)水平;通過(guò)體外Transwell小室基質(zhì)侵襲和遷移實(shí)驗(yàn),觀察Bmi-1表達(dá)沉默后對(duì)人肝癌細(xì)胞株MHCC97-H侵襲和遷移能力的影響。用熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后E-鈣黏蛋白和PTEN基因mRNA水平的變化。
　　結(jié)果：免疫組化染色顯示Bmi-1在肝癌組織中高表達(dá)，Bmi-1的表達(dá)與肝癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、病理分期之間無(wú)明顯相關(guān)(P＞0.05)，但與腫

5、瘤的組織病理學(xué)分級(jí)有關(guān)，在低分化肝癌中的表達(dá)明顯高于在高分化肝癌中的表達(dá)(P＜0.05)。Bmi-1的表達(dá)有肝癌的門(mén)靜脈癌栓有關(guān)(P＜0.05)。將針對(duì)Bmi-1基因的小干擾RNA(Bmi-1-siRNA)轉(zhuǎn)染入高轉(zhuǎn)移性人肝癌細(xì)胞株MHCC97-H后，流式細(xì)胞儀顯示，轉(zhuǎn)染效率可達(dá)到91％。與空白組、對(duì)照siRNA組相比，實(shí)驗(yàn)組Bmi-1-siRNA能有效抑制MHCC97-H細(xì)胞中Bmi-1基因的mRNA(F=56.199,P<0.05)

6、和蛋白表達(dá)水平。通過(guò)Transwell小室基質(zhì)侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)，我們分析了不同組細(xì)胞的侵襲遷移能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與空白組、對(duì)照siRNA組相比，Bmi-1-siRNA轉(zhuǎn)染的MHCC97-H細(xì)胞穿透能力明顯降低(F=186.66,12.746,P<0.05)。并且，E-鈣黏蛋白和PTEN基因mRNA水平明顯升高。
　　結(jié)論：Bmi-1參與調(diào)控了肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程。特異性的siRNA可以有效地干擾肝癌細(xì)胞中Bmi-1的表達(dá)。沉默Bmi-1