伊馬替尼、達沙替尼及其衍生物的研究

1、,,伊馬替尼、達沙替尼及其衍生物的研究,—— PTKs抑制劑的簡單分類舉例& 仿制藥研制流程導(dǎo)覽,伊馬替尼 Imatinib,·第一個分子靶向治療的抗腫瘤藥·分類：Type 2 小分子抑制劑 主要識別激酶的非活性構(gòu)象，即DFG-out構(gòu)象。·主要識別靶點：Bcr-Abl蛋白激酶 一種非受體型酪氨酸蛋白激酶，由BCR-ABL融合基因表達，是慢性粒細

2、胞白血?。–ML）的重要標志。其通過磷酸化和活化一系列下游底物，促使CML成熟粒細胞無限增生。BCR-ABL在正常細胞中不表達，所以它是治療CML理想的藥物靶標。·作用特點：只對BCR-ABL(IC50=207nmol/L)起作用，而對其他PTKs作用很弱。從而能抑制CML祖細胞的增殖，而正常細胞則不受損害。·作用機理：ATP的競爭性抑制劑,伊馬替尼 Imatinib,伊馬替尼 Imatinib,作用機理

3、,伊馬替尼 Imatinib,·突變原因：BCR-ABL蛋白激酶區(qū)發(fā)生特異性的點突變·主要表現(xiàn)： 1、T315突變?yōu)楫惲涟彼?，較為普遍 -影響Imatinib與Abl形成氫鍵，從而阻礙二者結(jié)合 -不影響Abl與ATP的結(jié)合，從而導(dǎo)致藥物耐受性 2、P-loop構(gòu)型改變，最為普遍 -G250E、Q252R、Y253F/H和E255K/V等突變所造成

4、 -占總體突變的36~48% -臨床數(shù)據(jù)表明，P環(huán)突變的Bcr-Abl激酶對Imatinib的敏感性約是野生型Bcr-Abl激酶的1/70~1/100,達沙替尼 Dasatinib,·針對Imatinib的耐藥性而發(fā)展的第二代Abl激酶靶向藥物·臨床上用于治療CML、血液腫瘤及實體瘤治療·分類：Type 1 小分子抑制劑 -作用原理：主要模擬ATP的腺嘌

5、呤環(huán)，通過與激酶鉸鏈區(qū)的ATP結(jié)合位點形成1~3個氫鍵來對激酶的DFG-in構(gòu)象進行識別 -結(jié)構(gòu)特點：含有一個雜環(huán)結(jié)構(gòu)來占據(jù)腺嘌呤活性位點，并能提供與疏水口袋Ⅰ和Ⅱ相互作用的2個側(cè)鏈·主要識別靶點：Bcr-Abl激酶及Src激酶 注：Src激酶是人體內(nèi)最大的非受體型酪氨酸激酶家族，可調(diào)節(jié)多種細胞過程·作用機理：ATP的競爭性抑制劑,達沙替尼 Dasatinib,,達沙替尼

6、 Dasatinib,3個氫鍵： Met318 的羰基氧和達沙替尼酰胺鍵氮上氫 Met318 的氨基氫和達沙替尼噻唑環(huán)上的氮 噻唑環(huán)與嘧啶環(huán)之間的氨基氫和 Thr315 氨基酸上羥基的氧,作用機理,仿制藥研制流程導(dǎo)覽,仿制藥： 與被仿制藥具有相同的活性成分、劑型、給藥途徑和治療作用的替代藥品，具有降低醫(yī)療支出、提高藥品可及性、提升醫(yī)療服務(wù)水平等重要經(jīng)濟和社會效益。,一、化合物的設(shè)計,選取Abl及Src雙重抑制作用

7、的達沙替尼進行骨架躍遷，其噻唑環(huán)為母核結(jié)構(gòu)，如下所示：,N、O、S等芳雜環(huán)和芳香環(huán)均已被專利保護！,-母核：硒唑環(huán) -側(cè)鏈：R1：保留達沙替尼的取代苯氨基 R2：擬令為甲酰芳香環(huán)。 -最終的選?。?R1：2,4-二甲基苯基氨基、2-甲基苯基氨基、2-氯-6-甲基-苯基氨基和3,4-亞甲二氧基苯基氨基，2-萘基氨基等6種

8、 R2：芳香族側(cè)鏈以及脂肪族側(cè)鏈 共設(shè)計了30個化合物。,一、化合物的設(shè)計,,,,,一、化合物的設(shè)計,一、化合物的設(shè)計,二、化合物的合成與結(jié)構(gòu)驗證,一共成功合成了20種化合物,驗證方法： 核磁共振氫譜技術(shù)（H NMR）：氫原子具有磁性，如電磁波照射氫原子核，它能通過共振吸收電磁波能量，發(fā)生躍遷。用核磁共振儀可以記錄到有關(guān)信號，處在不同環(huán)境中的氫原子因產(chǎn)生共振時吸收電磁波的頻率不

9、同，在圖譜上出現(xiàn)的位置也不同，各種氫原子的這種差異被稱為化學(xué)位移。利用化學(xué)位移，峰面積和積分值以及耦合常數(shù)等信息，進而推測其在碳骨架上的位置。 質(zhì)譜分析技術(shù)（MS）：用電場和磁場將運動的離子（帶電荷的原子、分子或分子碎片，有分子離子、同位素離子、碎片離子、重排離子、多電荷離子、亞穩(wěn)離子、負離子和離子－分子相互作用產(chǎn)生的離子）按它們的質(zhì)荷比分離后進行檢測的方法。測出離子準確質(zhì)量即可確定離子的化合物組成。,二、化合物的合成

10、與結(jié)構(gòu)驗證,二、化合物的合成與結(jié)構(gòu)驗證,二、化合物的合成與結(jié)構(gòu)驗證,二、化合物的合成與結(jié)構(gòu)驗證,二、化合物的合成與結(jié)構(gòu)驗證,三、化合物的活性測定：,酶水平抑制活性的評價方法： -測量化合物對激酶的抑制率 -測量活性化合物的IC50 注：IC50：被測量的拮抗劑的半抑制濃度公式如下： - 抑制率%=(樣品液孔讀數(shù)－空白孔讀數(shù))/(酶原液讀數(shù)－空白

11、孔讀數(shù))*100% - Y=本底+(最大值-本底)/(1+10^((LogIC50-X)*斜率)) 注：Y為吸光值，X為樣本梯度濃度值,三、化合物的活性測定：,1、初篩大部分化合物對 Abl 激酶、Src 激酶均有抑制作用，其中化合物 1、3、5、8、9、10、11、12、13、14、18、20 等 12 個化合物對 Abl、Src 激酶抑制率均超過了 70%，具有較好的活性，而對 Al

12、k、Flt3 激酶的抑制活性較低。,三、化合物的活性測定：,三、化合物的活性測定：,2、復(fù)篩化合物 1、3、8、9、14、20 與陽性對照藥活性相近，且對 Abl、Src 激酶的雙重抑制活性都很高，其中化合物 1 活性比陽性藥更高?；衔?1、3、8、9、14 對 Src 激酶的抑制活性高于其對 Abl 激酶的抑制活性，化合物 20 對 Abl的抑制活性略強于對 Src 激酶的抑制活性。,四、構(gòu)效關(guān)系討論,主要根據(jù)活性測定的結(jié)果，推測