抗生素標準物質的研究與建立

1、抗生素標準物質的研究與建立,天馬行空官方博客：http://t.qq.com/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：175569632,天馬行空官方博客：http://t.qq.com/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：175569632,抗生素標準品的建立、制備原則,1、溯源性 可溯源性是抗生素效價及含量測定用標準物質的基本要求。抗生素效價單位一但確定，就將一直延續(xù)下去

2、。 通常溯源性和測量的可靠性有關，即與效價單位確定及量值傳遞的準確性和精密度有關。故在建立抗生素原始基準品時，當定義了效價單位后，通常需要用多種方法分析原始基準品的純度，進而確定其效價，保證原始基準品定值的準確性；在標定各級標準物質時，通常要采用協(xié)作標定的方法，已保證獲得準確量值傳遞結果。,天馬行空官方博客：http://t.qq.com/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：17556963

3、2,2、同質性 標準物質的化學結構或組成通常要求和待測定物質的化學結構或組成完全相同。 標準品與待標樣品量反應“作用性質”的一致。 判斷同質性的關鍵并非其化學結構是否相同，而是其量反應曲線是否平行,3、連續(xù)性 抗生素的臨床應用劑量均以抗生素的效價單位為基礎，且在抗生素開發(fā)的前期依據其當時測定的效價結果而制定。故抗生素的效價單位一經確定，將一直延續(xù)下去，不得改動 仿制品種標準物質的效價單位應與該品種原始發(fā)明國家標

4、準物質的效價單位一致?？股貥藴饰镔|在改變測定方法時，如四霉素、金霉素標準品在轉為含量測定用對照品時，不該動原以鹽酸四環(huán)素，鹽酸金霉素重量計量的效價單位。,4、穩(wěn)定性 在保證其“同質作用”的前提下，選用具有穩(wěn)定固態(tài)結構的物質作為標準物質原料。根據此原則，對氨基糖甙類抗生素，通常選用其硫酸鹽而不直接選用其堿作為標準物質原料；對?－內酰胺抗生素，如選用頭孢唑林酸而不用頭孢唑林鈉制備頭孢唑林對照品；用阿莫西林三水物制備阿莫

5、西林對照品而不用阿莫西林一水物或阿莫西林鈉制備其對照品。,抗生素原始基準品的建立：,確定抗生素標準物質名稱、效價單位和表示方法選取原料：盡可能純化基準品原料原料組成分析（如：水分、揮發(fā)性物質、無機雜質殘留溶劑等）及測定基準品的純度分析確定基準品的含量。驗證,抗生素標準物質命名原則,1、基本原則 絕大部分抗生素標準物質不考慮其原料結構中的無機鹽離子、結晶水、酸根等，而是以其在臨床應用中起作用的活性結構命名。

6、,天馬行空官方博客：http://t.qq.com/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：175569632,,,,2、酯類抗生素標準物質,3、多種名稱的命名,天馬行空官方博客：http://t.qq.com/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：175569632,4、特例,根據專有用途進行命名：如加替沙星對照品和加替沙星·3/2H2O對照品，前者為加替沙星鑒別及含量測定用對照品，

7、后者為供含3/2H2O結晶水的加替沙星原料的紅外鑒別用對照品。在首次研發(fā)時，以臨床研究中起活性作用的計量結構命名。如鹽酸四環(huán)素，鹽酸金霉素，鹽酸阿霉素等。,抗生素效價單位的確定及問題,1、單組分抗生素：（1）以活性成分的重量計量效價單位 例如：硫酸鏈霉素，其活性成為為鏈霉素堿，鏈霉素的效價單位為鏈霉素堿1?g＝1單位，硫酸鏈霉素效價的理論值為：,,（2）以純抗生素制品鹽的重量計量效價單位 此效價單位中包

8、括了無效鹽的成分，從理論上講是不合理的，但對一些早期的抗生素品種，由于多年來已經習慣于此，如改變原以制品鹽重量計量效價單位，則對臨床用藥的影響較大，故仍沿用。目前常用的抗生素品種中僅有四環(huán)素、金霉素二個品種的效價單位采用這種效價單位計量方法。例如： 鹽酸四環(huán)素的效價單位（C22H24O8N2·HCl）1?g＝1四環(huán)素單位； 鹽酸金霉素的效價單位為（C22H23O8N2·HCl）1?g＝1金霉素單位。

9、 但對蒽環(huán)類抗腫瘤抗生素，如鹽酸阿霉素（C27H29NO11·HCl）、鹽酸依達吡星等，其效價單位也是以其鹽酸鹽的重量計量效價單位的。,（3）特定效價單位,對一些早期開發(fā)的組分較為復雜的抗生素，在開始生產及臨床使用時，由于研究手段、生產條件等的限制，無法獲得其準確的結構及組成，或無法得到其純品，還不能用重量單位來計量其效價單位，只能人為指定效價單位。如青霉素單位也稱牛津單位（Oxford unit）

10、的最初定義是“50ml肉湯培養(yǎng)基中，能抑制標準金葡菌生長的最少青霉素量為1個青霉素單位”。 在獲得青霉素G純品后，證明青霉素G鈉（C16H17N2NaO4S）0.5988?g＝1青霉素單位。目前使用特定效價單位的抗生素品種還有制霉菌素、桿菌肽、多粘菌素等。,2、多組分抗生素效價單位的確定,（1）以其中單一組分的活性成分的重量確定效價單位。如慶大霉素含有C1、C1a、C2a、C2等多個組分，慶大霉素的效價單位以C1（C

11、21H43O7N5）來計量，1?g的C1＝1慶大霉素單位。采用這種方法確定效價單位在“溯源性”方面較為明確，且便于建立原始基準品，并可保證標定中標準物質于和待標樣品不存在非“同質”問題，這是目前鼓勵采用的方法。,（2）將多個抗生素組分按一定比例混合，以混合組分活性成分的重量確定效價單位。如螺旋霉素主要為含I、II、III三個組分的混合物，其效價單位定義為1?g混合物?50％的組分I（C43H74N2O14）、25％的組分II（C45H7

12、6N2O14）和25％的組分III（C46H78N2O14）?＝1螺旋霉素單位。采用這種方法的缺點在于建立原始基準品比較麻煩。,天馬行空官方博客：http://t.qq.com/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：175569632,（3）多個抗生素組分不定比例的混合物，以混合組分活性成分的重量確定效價單位。如吉它霉素為含有A1、A3、A4、A5、A6、A7等的多組分抗生素，其效價單位定義為1?g吉它霉素混合物（

13、C37－42H61－69NO14－15）＝1吉它霉素單位。此效價單位類似于特定效價單位，其“溯源性”較模糊，目前新藥開發(fā)中不鼓勵使用。,1、有明確溯源 —多為進口藥品檢驗用國家原始基準品的建立,基準品建立的類型,2、無明確溯源的 —如：新藥注冊中的仿制藥：地紅霉素、司丙紅霉素、頭孢吡肟等。,（1）、根據世界衛(wèi)生組織（WHO）基準品建立的指導原則，采用多種測試分析方法，分析確定原料的純度和雜質的含量

14、。以扣除法確定原料的含量。（2）、在可以得到企業(yè)標準品/對照品或原始發(fā)明廠的標準品/對照品的情況下：a、以企業(yè)的標準品/對照品為對照，進行標定。驗證方法（1）的結果。b、原始發(fā)明廠的標準品/對照品或以有明確溯源的標準品為基準進行協(xié)作標定。（3）在確定首批標準品、對照品的量值中，一般采用將方法（1）的結果與標定結果合并計算，作為首批標準品/對照品的含量?；蛞苑椒ǎ?）結果核對或校正方法（1）結果，即可驗證方法（1）結果的準確性，又

15、不侵犯知識產權。,3、無量值溯源 —新藥注冊中的國家一類新藥，如頭孢硫脒,頭孢硫瞇是我國自主研制的國家一類新藥。在世界衛(wèi)生組織（WHO）基準品建立的指導下，結合我室多年來根據建立首批標準品/對照品的經驗，按照“基準品效價定義→組成分析→純度分析→含量確定→結果驗證”的基本步驟，研制建立國首批基準品。如：力達霉素、安妥沙星、卡德沙星等基準品。,1、命名及效價單位確定,2、組成分析,,,理論值分析,元素測

16、定,根據已知分子式計算理論含量,根據N,S元素測定結果，推測純度,,,有機成分,無機成分,,揮發(fā)性物質,無機雜質,鹽、酸根的量,費休氏法，干燥失重，TGA,熾灼殘渣，TGA,離子電位滴定法,,,,3、純度分析,直接測定法,間接測定法,DSC、NMR、HPLC－ELSD歸一化法、HPLC－IR歸一化法,有機雜質的分析與測定,純度的測定,TLC、HPLC－不同的檢測器聯(lián)用、HPCE,HPLC－ELSD自身對照法,,,,,,,4、含量確

17、定,,直接扣除法,,效價（u/mg）＝(1－水分或揮發(fā)性物質％－殘留溶劑％ －殘渣％) ?純度％?1000(u/mg) 含量（％）=(1－水分或揮發(fā)性物質％－殘留溶劑％ －殘渣％) ?純度％,HPLC－ELSD隨行曲線法,外標法,抗生素標準物質的標定原則,1、確保量值傳遞的連續(xù)性國家標準收載的大部分抗生素或為仿制品，或由國外進口。換批制備以中檢所

18、提供保存標準物質為基準；定期以國際通用藥典標準物質或國際標準物質核對校驗。,2、確保量值傳遞的準確性,采用現(xiàn)行質量標準中收載的方法。采用合理的實驗設計減少實驗偏差。采用加權平均的原理進行合并計算。標準品標定結果除應求出其標示效價或含量結果外，還應以95％的置信限表征其誤差范圍。對純度較高的樣品可由化學法直接標定,3、標準物質量值傳遞的質量保證－協(xié)作標定方式,中檢所職責協(xié)作標定單位之一對標定的標準物質從原材料選擇、制備方法

19、、標定方案及分裝與包裝條件等進行全面技術工作和資料審核對各協(xié)作單位上報的標定結果進行統(tǒng)計分析及定值。同時對定值準確性、量值溯源及標準物質的穩(wěn)定性作出全面的評價。對可否作為國家標準物質的結論。將國家標準物質制備報告報送室、所級技術負責人 審核或標準物質專家委員會（首批基準品）審核。將協(xié)作標定結果及統(tǒng)計分析結果以公文的形式反饋給協(xié)作單位。負責標準物質的保存、發(fā)放及管理。,協(xié)作單位職責具備相當?shù)膶嶒炘O備及符合要求的實驗技術人員。

20、參加協(xié)作標定人員：應按協(xié)作標定技術要求和sop操作，獨立完成協(xié)作標定工作。提供符合協(xié)作技術要求的測定結果和原始數(shù)據。寫出協(xié)作標定報告并對測定結果進行數(shù)據統(tǒng)計。協(xié)作人員在無任何確定的試驗失誤情況下不得隨意剔出測定結果。項目負責人：組織并按時完成協(xié)作標定工作。對本協(xié)作單位的試驗結果進行數(shù)據統(tǒng)計，寫出協(xié)作標定報告。將協(xié)作標定結果和全部原始資料或復印件以公文和公文附件形式報送中檢所。協(xié)作單位不得以任何形式泄露協(xié)作結果，或與其他同品種的協(xié)作

21、單位核對數(shù)據。,,羅紅霉素標準品協(xié)作標定,頭孢氨芐對照品協(xié)作標定,,抗生素標準物質的使用,抗生素標準物質可分為生物標準品和化學對藥品。生物標準品主要用于抗生素微生物效價測定，而化學對照品則主要用于鑒別，有關物質和含量測定用。 各種標準物質必須嚴格按照其規(guī)定的用途使用，不可混用。,由于抗生素是一類化學性質不穩(wěn)定的生物活性物質，其標準物質都熔封在安瓶中，必須按照抗生素標準物質的使用說明書的要求進行使用和保存，特別應注意低溫（5