穩(wěn)定分泌抗豬細(xì)小病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的建立及初步應(yīng)用.pdf

1、本研究將鎳離子金屬螯合親和層析法純化的豬細(xì)小病毒VP2蛋白加入等體積的弗氏完全佐劑或弗氏不完全佐劑，分別制成完全佐劑抗原和不完全佐劑抗原，免疫6-8周齡BALB/c雌鼠，五免過后，ELISA效價(jià)達(dá)到1:51200以上的小鼠腹腔超強(qiáng)免疫一次，三天后取小鼠的脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合。
　　 用蔗糖包埋、差速離心法制備的豬細(xì)小病毒全病毒作為包被抗原建立間接ELISA方法進(jìn)行篩選，篩選抗豬細(xì)小病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株。

2、采用有限稀釋法，經(jīng)過5-6次克隆，最終獲得4株穩(wěn)定分泌抗豬細(xì)小病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為：2C5、485、1A11、5C6。經(jīng)測定485和12C5僅與全病毒發(fā)生反應(yīng)，1A11和5C6為針對VP2蛋白的單克隆抗體，亞類鑒定結(jié)果顯示，485是IgG1亞類，2C5是IgM亞類。對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行染色體分析，試驗(yàn)結(jié)果所得平均染色體數(shù)目在92～108之間，符合SP2/0細(xì)胞的染色體數(shù)目與正常小鼠脾細(xì)胞的染色體數(shù)目之和，表明所獲的抗體分泌

3、細(xì)胞為雜交瘤細(xì)胞。對4株雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體的特異性檢測，結(jié)果顯示其僅與滅活的豬細(xì)小病毒抗原發(fā)生反應(yīng)，呈陽性，而不與豬偽狂犬病毒(PRV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬2型圓環(huán)病毒(PCV2)抗原反應(yīng)。經(jīng)測定，所得4株抗豬細(xì)小病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清ELISA效價(jià)為1:800-1:8000，小鼠腹水單克隆抗體ELISA效價(jià)為1:8000-1:1024000。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，經(jīng)過連續(xù)傳代10代、25代和兩次凍存復(fù)