分泌抗四環(huán)素單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的制備和初步應(yīng)用.pdf

1、本研究利用Mannich反應(yīng)分別合成了四環(huán)素(Tc)與載體蛋白BSA(牛血清白蛋白)、HSA(人血清白蛋白)的連接物，并運(yùn)用紫外分光光度法和SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)對抗原進(jìn)行了鑒定，制備了兩種人工抗原。用此人工抗原免疫小鼠，成功獲得針對四環(huán)素的抗體。用紫外分光光度法進(jìn)行了鑒定，并計算連接比率，結(jié)果分別是23∶1(Tc-BSA)、22∶1(Tc-HSA)。 本研究成功建立了檢測抗四環(huán)素抗體的間接ELISA方法

2、，其主要條件如下：pH9.6、0.05mol·L-1的碳酸鹽緩沖溶液(CBS)為包被液，4μg·mL-1的連接抗原Tc-HSA(四環(huán)素-人血清白蛋白)為包被抗原，0.5％明膠為封閉液，1∶1000稀釋的HRP酶標(biāo)記的羊抗小鼠抗體作為二抗，TMB(3，3，5，5-四甲基聯(lián)苯胺)作為底物。試驗證明本法特異性強(qiáng)，有較好的重復(fù)性。用該法對Tc免疫小鼠的血清抗體及其雜交瘤細(xì)胞單抗上清進(jìn)行檢測，獲得滿意的效果。 間接ELISA檢測結(jié)果顯示，

3、Tc-BSA、Tc-HSA兩種連接物在四免后抗體效價均達(dá)到1∶3200以上。通過細(xì)胞融合，獲得一株能穩(wěn)定分泌抗四環(huán)素特異性單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，命名為C4。其細(xì)胞培養(yǎng)上清效價達(dá)1∶12800.用該細(xì)胞株注入小鼠腹腔制作單抗腹水，腹水效價為1∶409600。該單抗與其他抗生素的交叉反應(yīng)率均低于0.01％。該雜交瘤細(xì)胞株連續(xù)傳代20代，3個月內(nèi)凍存、復(fù)蘇3次，仍能穩(wěn)定分泌抗Tc的單抗。 本文建立了檢測Tc殘留的間接競爭酶聯(lián)免疫吸