混合培養(yǎng)基模式培養(yǎng)雜交瘤細胞表達單克隆抗體.pdf

1、雜交瘤細胞表達的單抗具有特異性強、成分均一可控等優(yōu)勢，廣泛應(yīng)用于疾病治療、醫(yī)學(xué)診斷、生物免疫檢測和蛋白純化等領(lǐng)域。本課題采用混合培養(yǎng)基模式將雜交瘤細胞進行減血清懸浮馴化培養(yǎng)，通過優(yōu)化基礎(chǔ)培養(yǎng)基，流加培養(yǎng)基，流加策略，接種密度和添加物來提高單克隆抗體的表達量，并進行抗體的分離純化。
　　采用逐步減血清懸浮馴化的方法使雜交瘤細胞可以在2％低含量血清的條件下懸浮生長，其中在OptiCHO培養(yǎng)基中達到了完全去血清馴化?？疾炝怂姆N不同接種密

2、度，篩選出了最適宜雜交瘤細胞生長表達的初始接種密度0.3×106cells/mL。采用不同商業(yè)培養(yǎng)基混合配比的方法篩選出RPM1640:SFM4CHO:OptiCHO在4.5:4.5:1混合配比的條件下，可得到最高的最終細胞抗體表達量相比于其他7中混合配比條件。通過對比5種不同的流加液，分析細胞生長狀態(tài)和產(chǎn)物表達量，篩選出來流加液FD004作為雜交瘤細胞流加培養(yǎng)時的流加培養(yǎng)基。考察流加培養(yǎng)基FD004的每次流加體積和流加次數(shù)，每兩天流加

3、一次，每次流加量為初始體積的3%時，雜交瘤細胞可得到最高的最終細胞抗體表達量168mg/L相比于其他兩種流加策略。通過搖瓶實驗確定的雜交瘤細胞培養(yǎng)工藝血清濃度為2%胎牛血清、培養(yǎng)基配比為RPM1640:SFM4CHO:OptiCHO為4.5:4.5:1、接種密度為0.3×106cells/mL，采用批次補料流加培養(yǎng)，每兩天流加一次，每次流加量為初始體積的3%在5L攪拌式生物反應(yīng)器中進行放大培養(yǎng)，得到了245mg/L的抗體表達量。