犬細(xì)小病毒單克隆抗體的制備和初步應(yīng)用.pdf

1、由犬細(xì)小病毒(Canine Parvovirus，CPV)引起的急性出血性胃腸炎和心肌炎是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種犬烈性傳染病，主要危害幼犬，特別是2～6月齡幼犬，發(fā)病率和死亡率均很高。該病自首次報(bào)道以來(lái)，在世界各國(guó)均有發(fā)生和流行。 本研究利用CPV膠體金試紙條對(duì)收集的10份臨床樣品進(jìn)行檢測(cè)，共檢測(cè)到4份陽(yáng)性。用上述陽(yáng)性樣品接種FK-81細(xì)胞培養(yǎng)后，成功地分離到一株CPV(2<'＃>)，以此為抗原制備了針對(duì)該病毒的單克隆抗體(Monoc

2、lonal antibody，McAb)。McAb的制備方法如下：用PEG沉淀法濃縮CPV的細(xì)胞培養(yǎng)液，依此為抗原免疫8周齡BALB/c小鼠，經(jīng)過(guò)3次皮下注射免疫后，再進(jìn)行尾靜脈加強(qiáng)免疫，3d后取小鼠脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞SP2/0-Ag-14進(jìn)行融合。通過(guò)間接ELISA試驗(yàn)對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選，陽(yáng)性株按有限稀釋法進(jìn)行3次亞克隆后，共獲得了2株能穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，分別命名為4E4和5C8，細(xì)胞上清效價(jià)為1：10<'3>和1：1