飼料和尿液樣品中糖皮質(zhì)激素的檢測(cè)方法研究.pdf

1、本研究建立飼料樣品和尿液樣品中潑尼松、潑尼松龍、甲基潑尼松龍、地塞米松、倍他米松、倍氯米松、醋酸氟氫可的松、醋酸可的松、氫化可的松等9種糖皮質(zhì)激素類藥物的測(cè)定方法。 飼料樣品以甲醇為提取溶劑，震蕩提取后，采用固相萃取凈化技術(shù)進(jìn)行凈化，其中碳黑柱串接氨基柱凈化效果最好，采用蠕動(dòng)泵連續(xù)進(jìn)樣進(jìn)行質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化，采用ESI-離子模式進(jìn)行調(diào)諧，發(fā)現(xiàn)糖皮質(zhì)激素類藥物的離子峰有[M+H]+、[M-H]-、[M+HCOO]-等多種形式，其中[M+

2、HCOO]-響應(yīng)最高，因此選擇目標(biāo)化合物的[M+HCOO]-作為碰撞誘導(dǎo)解離的母離子。醋酸氟氫可的松和醋酸可的松的特征碎片離子為[M-H]-和[M-H-HCOOCH3]-，其他7種糖皮質(zhì)激素的特征碎片離子為[M-H]-和[M-H-CH2O]-。用30％乙腈作為上機(jī)液。通過(guò)在空白飼料中添加3個(gè)不同濃度（低、中、高三個(gè)濃度）的9種糖皮質(zhì)激素類藥物進(jìn)行準(zhǔn)確度試驗(yàn)，每個(gè)濃度做6個(gè)平行樣，重復(fù)3次。本方法在空白飼料中進(jìn)行5ng/g～20ng/g的

3、添加，方法的回收率為51.1％～88.2％，批內(nèi)、批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于20％。本方法適用于配合飼料、濃縮飼料及預(yù)混合飼料中9種糖皮質(zhì)激素單個(gè)或混合物的測(cè)定。最低檢出限為2μg/kg，最低定量限為5μg/kg。 尿液樣品采用5mL尿液中加入50μlβ-鹽酸葡萄糖醛苷酶-芳基硫酸酯酶，在pH=5.2的乙酸銨緩沖液條件下，37℃下酶解。采用乙酸乙酯提取，通過(guò)HLB串接氨基柱凈化，回收率穩(wěn)定，重現(xiàn)性較好。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)對(duì)比采用乙酸乙酯-甲醇

4、（60：40）為洗脫溶液，選用乙腈-水（30：70）溶液為上機(jī)進(jìn)樣溶液。在空白尿液中添加低、中、高3個(gè)不同濃度的9種糖皮質(zhì)激素類藥物進(jìn)行準(zhǔn)確度試驗(yàn)，每個(gè)濃度做6個(gè)平行樣，重復(fù)3次。本方法在尿樣中進(jìn)行1ng/mL～5ng/ml的添加，方法的回收率為55.0％～106.2％，批內(nèi)、批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于20％。本方法適用于動(dòng)物尿液中9種糖皮質(zhì)激素單個(gè)或混合物的測(cè)定。方法的最低檢測(cè)限為0.5μg/L，最低定量限為1.01μg/L。 本