2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、豬圓環(huán)病毒(Porcinecircorirus,PCV)是迄今為止發(fā)現(xiàn)的一種最小的動(dòng)物病毒,其基因組為單股環(huán)狀DNA,病毒粒子無(wú)囊膜,呈二十面體對(duì)稱。PCV可劃分為PCV1和PCV2兩種基因型,其中PCV1基因組全長(zhǎng)1759bp,無(wú)致病性,但廣泛存在于豬體和豬源細(xì)胞系,首先由Tischer于PK-15細(xì)胞中發(fā)現(xiàn);PCV2基因組長(zhǎng)1767bp或1768bp,被認(rèn)為是仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征(Postweaningmultisystemi

2、cwastingsyndrome,PMWS)的主要病原。PCV2有兩個(gè)主要的開放閱讀框(ORF):ORF1和ORF2,ORF2基因編碼該病毒的結(jié)構(gòu)蛋白,是區(qū)分PCV1和PCV2的重要區(qū)域。我國(guó)于2000年首次發(fā)現(xiàn)了PCV2的存在,該病毒在我國(guó)豬場(chǎng)中感染率高,豬群的平均陽(yáng)性率一般都大于20%,有的甚至超過(guò)50%,有些地區(qū)高達(dá)100%,可以說(shuō)目前該病毒已在我國(guó)豬群中普遍存在,每年因PCV2感染造成經(jīng)濟(jì)損失達(dá)數(shù)億元。
   為了構(gòu)建P

3、CV2CAP基因重組禽痘病毒,將其亞克隆到含有LP2EFP2早晚期啟動(dòng)子的載體pSY538的BamHI何點(diǎn),將帶有痘曲病毒啟動(dòng)子P11的LacZ基因平端克隆到質(zhì)粒pSY681的SfiⅠ位點(diǎn),然后切下含有LP2EP2啟動(dòng)子的CAP片段再亞克隆到禽痘病毒載體pSY681的NotⅠ位點(diǎn),用脂質(zhì)體將其轉(zhuǎn)染已感染親本禽痘病毒S-FPV-017株的雞胚成纖維細(xì)胞,在含有x-gal的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行藍(lán)斑篩選,獲得重組病毒rFPV-CAP,通過(guò)PC

4、R和酶切進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明獲得包含有PCV2CAP基因的禽痘病毒并且具有穩(wěn)定的遺傳性狀。以間接免疫熒光法證實(shí)感染rFPV-CAP的CEF中存在表達(dá)的CAP蛋白,為研發(fā)PCV2病毒重組禽痘病毒疫苗奠定了基礎(chǔ)。
   共表達(dá)PCV2CAP基因與豬IL-18基因的重組禽痘病毒的構(gòu)建,將含有LP2EP2啟動(dòng)子的IL-18基因克隆至含有CAP基因的重組禽痘病毒rFPV-S1的上游,用脂質(zhì)體將其轉(zhuǎn)染已感染親本禽痘病毒S-FPV-017株的雞

5、胚成纖維細(xì)胞,在含有x-gal的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行藍(lán)斑篩選,獲得重組病毒rFPV-CAP-IL-18,通過(guò)PCR和酶切進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明獲得包含有PCV2CAP基因和IL-18的重組禽痘病毒并且具有穩(wěn)定的遺傳性狀。以間接免疫熒光法證實(shí)感染rFPV-CAP-IL-18的CEF中存在表達(dá)的CAP蛋白。為開發(fā)利用IL-18的佐劑效應(yīng)及構(gòu)建共表達(dá)IL-18基因和保護(hù)性抗原基因的重組禽痘病毒疫苗奠定基礎(chǔ)。
   本研究成功獲得了PCV2

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