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1、豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus 2)是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原,該病主要表現(xiàn)為體重下降,呼吸困難,黃疸以及間質(zhì)性肺炎,淋巴結(jié)腫大,肝炎和腎炎等癥狀。PMWS主要感染斷奶仔豬和育肥豬,自1991年在加拿大發(fā)生后,迅速蔓延到各養(yǎng)豬國(guó)家,成為目前危營(yíng)世界養(yǎng)豬業(yè)的重要疫病之一。 本研究將豬圓環(huán)病毒2型(P
2、CV2)用0.2%的甲醛37℃作用一定時(shí)間后接種PK-15細(xì)胞,盲傳3代,用PCR方法檢測(cè)滅活效果。將滅活的PCV2加入適量的白油和氫氧化鋁膠制成PCV2油佐劑和鋁膠佐劑滅活疫苗后免疫小鼠,共免疫2次,時(shí)間間隔3周,分別于一免后21天和35天進(jìn)行ELIsA抗體檢測(cè)。同時(shí)為了評(píng)價(jià)國(guó)產(chǎn)油佐劑和進(jìn)口油佐劑的免疫效果,我們進(jìn)行了豬體免疫效力試驗(yàn)。通過(guò)ELISA抗體、攻毒后臨床表現(xiàn)及體溫變化、剖解時(shí)的病理變化、平均日增重及病毒血癥等指標(biāo)對(duì)疫苗效果
3、進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果為:①PCV2能被0.2%甲醛完全滅活,時(shí)間為16 h。②PCV2油佐劑和鋁膠佐劑滅活疫苗免疫小鼠后均能產(chǎn)生較好的免疫應(yīng)答,并且油佐劑滅活疫苗免疫效果好于鋁膠佐劑滅活疫苗。③豬體免疫效力試驗(yàn)表明,兩油苗均產(chǎn)生較高水平的ELISA抗體。攻毒后,攻毒對(duì)照豬平均體溫高于免疫豬,空白對(duì)照豬在整個(gè)攻毒期中體溫始終保持正常。攻毒后免疫豬及空白對(duì)照豬平均體重均升高,而攻毒對(duì)照豬平均體重有所降低,且兩免疫組和空白對(duì)照組之間平均日增重差異顯
4、著(P<0.05)。病毒血癥檢測(cè)表明,攻毒21天后未在免疫豬血清中檢測(cè)到PCV2,而在兩頭攻毒對(duì)照豬血清中都檢測(cè)到了PCV2。用PCR方法檢測(cè)PCV2在肺臟、脾臟和淋巴結(jié)中的分布表明,攻毒后40天,攻毒對(duì)照豬在肺臟、脾臟和淋巴結(jié)中都檢測(cè)到了病毒,而免疫組8頭豬中僅在1頭豬的脾臟中檢測(cè)到病毒。 此外,本研究還將PCV2-Cap蛋白重組腺病毒(rAd-Cap)用0.2%的甲醛37℃作用一定時(shí)間后接種293細(xì)胞,盲傳3代,檢測(cè)滅活效果
5、。將rAd-Cap滅活后,加入適量的白油和氫氧化鋁膠制成Cap蛋白重組腺病毒油佐劑和鋁膠佐劑滅活疫苗,免疫小鼠,3周后加強(qiáng)免疫一次,然后在一免后21天和35天進(jìn)行ELISA抗體檢測(cè)。為了進(jìn)一步評(píng)價(jià)國(guó)產(chǎn)油佐劑和進(jìn)口油佐劑的免疫效果,我們進(jìn)行了豬體免疫效力試驗(yàn)。通過(guò)ELISA抗體、攻毒后臨床表現(xiàn)及體溫變化、剖解時(shí)的病理變化、平均日增重及病毒血癥等指標(biāo)對(duì)疫苗效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。 結(jié)果為: ①rAd-Cap能被甲醛完全滅活,時(shí)間為14
6、 h。 ②rAd-Cap油佐劑和鋁膠佐劑滅活疫苗免疫小鼠后均能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答,并且油佐劑滅活疫苗免疫效果好于鋁膠佐劑滅活疫苗。 ③豬體免疫效力試驗(yàn)表明,兩油苗均能誘導(dǎo)豬體產(chǎn)生較高水平的ELISA抗體。攻毒后,攻毒對(duì)照豬平均體溫高于免疫豬,空白對(duì)照豬體溫始終保持正常。攻毒后免疫豬及空白對(duì)照豬平均體重均升高,而攻毒對(duì)照豬平均體重有所降低,但兩免疫組和空白對(duì)照組之間平均日增重差異不顯著(p>0.05)。病毒血癥檢測(cè)表
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