藍舌病病毒1型DNA疫苗及重組禽痘病毒載體疫苗的研究.pdf

1、藍舌病(Bluetongue，BT)是由呼腸孤病毒科環(huán)狀病毒屬藍舌病病毒(Bluetongue virus，BTV)引起的一種反芻動物的蟲媒傳染病，主要感染綿羊、山羊、牛、鹿和駱駝等。根據(jù)BTV表面蛋白VP2抗原性不同，BTV目前至少可以分為27個不同血清型，在我國已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的血清型有BTV-1，2，3，4，12，15，16七個血清型，其中1型和16型是我國主要流行血清型。
　　疫苗免疫是預防和控制藍舌病最有效的方法。目前，市場上應

2、用的藍舌病病毒疫苗主要是弱毒苗及滅活苗，但這兩種疫苗均存在一定的缺陷。滅活苗影響流行病學監(jiān)測，弱毒苗可能會產(chǎn)生毒力殘留及與流行野毒株發(fā)生基因重組。因此，研制新型的更為安全有效的疫苗對于藍舌病的防控顯得尤為重要。
　　本研究分別構(gòu)建了3種表達藍舌病病毒1型(BTV-1)表面蛋白VP2、VP5及共表達(VP2+VP5)的重組禽痘病毒載體疫苗及重組DNA疫苗，分別命名為rFPV-VP2、rFPV-VP5、rFPV-(VP2+VP5)、p

3、CAG-VP2、pCAG-VP5和pCAG-(VP2+VP5)。首先在BALB/c小鼠模型上對其免疫效果進行了系統(tǒng)評價。我們采取了3種不同的免疫策略:DNA疫苗首免及加免;rFPV疫苗首免及加免;DNA疫苗首免、rFPV疫苗加免。而每一種免疫策略中又包含了3種不同的免疫方式，即VP2單獨免疫組、VP2和VP5聯(lián)合免疫組以及共表達(VP2+VP5)組。結(jié)果表明，在3種免疫策略中，DNA疫苗首免、rFPV疫苗加免這一策略可以更好的誘導機體產(chǎn)

4、生體液免疫及細胞免疫;而在每一種免疫策略中，共表達(VP2+VP5)免疫組的免疫效果均優(yōu)于VP2單獨免疫組或VP2和VP5聯(lián)合免疫組。在所有免疫組中，用DNA疫苗pCAG-(VP2+VP5)首免、rFPV-(VP2+VP5)加免是最佳的免疫策略，可以誘導產(chǎn)生最高的中和抗體及最佳的細胞免疫反應。
　　基于在小鼠實驗上的結(jié)果，本研究進一步將DNA疫苗pCAG-(VP2+VP5)首免、rFPV-(VP2+VP5)加免這一免疫策略在藍舌病

5、本體動物綿羊上進行了系統(tǒng)的免疫評價。在綿羊上的研究結(jié)果表明，用pCAG-(VP2+VP5)首免、rFPV-(VP2+VP5)加免同樣可以在藍舌病本體動物綿羊上誘導產(chǎn)生高滴度的中和抗體及良好的細胞免疫反應。在加強免疫后2周，中和抗體滴度最高可達188.36，高于文獻報道的BT重組金絲雀痘疫苗和VLP疫苗在綿羊上誘導產(chǎn)生的中和抗體滴度。
　　BTV攻毒試驗需要在生物安全三級實驗室進行，由于試驗條件的限制，目前還未進行下一步的攻毒試驗。

6、雖未進行攻毒保護的研究，但是據(jù)已有文獻報道，BTV疫苗免疫保護效果與中和抗體滴度和細胞免疫反應有著密切的關(guān)系。本試驗用DNA疫苗pCAG-(VP2+VP5)首免、重組禽痘病毒疫苗rFPV-(VP2+VP5)加免后能夠產(chǎn)生高滴度的中和抗體和良好的細胞免疫反應，因此我們有理由推測用pCAG-(VP2+VP5)首免、rFPV-(VP2+VP5)加免這一免疫方式可以對綿羊提供良好的免疫保護。本研究構(gòu)建的藍舌病病毒1型DNA疫苗及重組禽痘病毒疫苗