2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、為闡明我國禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒(Reticuloendotheliosisvirus,REV)天然整合進(jìn)禽痘病毒(Fowlpoxvirus,F(xiàn)PV)基因組的普遍性,對(duì)5株FPV疫苗株和4株分離的野毒株進(jìn)行調(diào)查研究。主要方法包括:聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR),斑點(diǎn)雜交(Dot-blot),間接免疫熒光分析(IFA)等。IFA用以鑒定是否有游離病毒的污染,PCR和Dot-blot用以鑒定FPV中是否有REV片段整合。通過標(biāo)記探針,進(jìn)行Dot

2、-blot,快速方便適宜于多個(gè)樣品的檢測,設(shè)計(jì)來自REV的特異于基因LTR,env,pol,gag引物各一對(duì),擴(kuò)增并測序比較,PCR擴(kuò)增測序更準(zhǔn)確。二者各有自身的優(yōu)點(diǎn),因此結(jié)合應(yīng)用。結(jié)果表明,9株FPV均有REV-LTR和REV-env的整合,未檢測到REV-pol和REV-env,REV基因組片段整合進(jìn)FPV在我國FPV疫苗株及野毒株的現(xiàn)象已非常普遍。 參照國外發(fā)表的REV5’長末端重復(fù)序列(LTR)在FPV疫苗株基因組上的整

3、合位點(diǎn)及相關(guān)序列,合成一對(duì)來自FPV的引物,從國內(nèi)5個(gè)不同廠家生產(chǎn)的禽痘疫苗中經(jīng)PCR均擴(kuò)增到REV-5’LTR。通過序列比較發(fā)現(xiàn),我國5個(gè)FPV疫苗毒株中REV-5’LTR整合位點(diǎn)與美國和澳大利亞的天然重組禽痘疫苗完全一致。其中,有3個(gè)的REV-5’LTR插入序列也與美國的Vac-3-Am株和澳大利亞的Vac-M3-Au株有100%的同源性。另2個(gè)中國疫苗毒株中的REV-LTR插入序列與美國疫苗毒株Vac-1-Am中的REV-LTR插

4、入序列有99.6%的同源性。這5個(gè)中國禽痘疫苗毒株中整合的REVLTR與我國近年分離到的REV野毒株HA9901的5’LTR的同源性只有75.4%~92.4%。 應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng),IFA,Dot-blot和PCR等方法,經(jīng)過對(duì)不同地區(qū)分離的4株FPV田間分離株研究發(fā)現(xiàn),其中3株檢測到有REV基因成分長末端重復(fù)序列(LTR)和囊膜糖蛋白(env)基因片斷的整合,而另外1株LY-1整合有REV的4種基因成分LTR,env,pol,gag

5、片段。進(jìn)一步通過PCR方法,以9對(duì)來自REV的前后重疊的引物擴(kuò)增整合進(jìn)這株FPV中的REV全基因組cDNA序列片段。將9個(gè)序列拼接表明,LY-1的REV(命名為FPV-C-REV)全長7889bp,與1997年澳大利亞學(xué)者發(fā)現(xiàn)的禽痘疫苗FPV-S株中整合的REV序列同源性92%,他們都缺失REV的3'LTR,而且LY-1還缺失REV-gag約80bp。用LY-1人工接種SPF雞,檢測到REV抗體陽性,但是沒有檢測到REV病毒粒子。通過合

6、成2對(duì)上下游分別來自FPV和REV的異源引物FPV-R、FPV-E,其中FPV-R指5’端引物來自3'FPV,而3’端引物來自REV的5'LTR;FPV-E指3’端引物來自5'FPV,而5,端引物來自REV的env。PCR擴(kuò)增測序發(fā)現(xiàn)野毒株LY-1的REV整合位點(diǎn)都在FPV的開放閱讀框(openreadingframe,ORF)201-203區(qū),在FPV基因組的232469bp和232602bp間。根據(jù)上述結(jié)果推測,F(xiàn)PV野毒株LY-1

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